在小鼠体内的巨噬细胞的枯竭和重建
Summary
巨噬细胞发挥核心作用的动态平衡，并在许多组织的病理。这里介绍的协议描述消耗巨噬细胞的方法<em>在体内</em>，来自偏光巨噬细胞，骨髓穿刺，继转移到小鼠巨噬细胞。这些技术允许极化的巨噬细胞在健康和疾病中发挥的作用的决心。
Abstract
巨噬细胞是重要的球员，在传染病的挑战或损伤的先天免疫反应，发起的先天免疫反应和指挥后天免疫反应。巨噬细胞功能障碍可能导致无法安装适当的免疫反应，因此，已在许多疾病的进程，包括炎症性肠病牵连。巨噬细胞显示极化表型大致分为两类。经典活化的巨噬细胞，与干扰素γ或LPS刺激激活，发挥了至关重要的作用，在细菌的挑战，而另外激活的巨噬细胞，IL-4和IL-13激活，参与清除杂物和组织重塑和已在该决议牵连阶段的炎症。在体内的炎症反应，巨噬细胞的免疫细胞浸润的复杂混合物中发现，并可能加剧或resolvin参加Ğ炎症。巨噬细胞的作用，在整个动物模型的定义在原地 ，这是必要的检查消耗从复杂的环境中的巨噬细胞的影响。极化的巨噬细胞表型定义问原位巨噬细胞表型的作用的问题，可以导出体外 ，从骨髓穿刺，并加回或没有事先枯竭的巨噬细胞，小鼠。在这里提出的协议中含有氯膦酸二钠，脂质体，与PBS注射控件，用来消耗结肠巨噬细胞在葡聚糖硫酸钠（DSS）诱导小鼠结肠炎。此外，巨噬细胞的极化，推导出体外，并转移到小鼠静脉注射。这种方法的一个需要注意的是，氯膦酸二钠含脂质体耗尽所有专业的吞噬细胞，包括树突状细胞和巨噬细胞，所以，以确保枯竭所观察到的效果是巨噬细胞特异性，重组ØF的巨噬细胞过继转移表型是必要的。全身巨噬细胞耗竭小鼠也可以通过回交小鼠实现到细胞CD11b-DTR背景，这是一个很好的补充办法。含有氯膦酸二钠脂质体介导的枯竭的优势是，它不参与回交小鼠需要的时间和费用，它可以在小鼠小鼠（C57BL / 6小鼠，BALB / c小鼠，或混合背景的背景下，无论使用）。
Protocol
Discussion
巨噬细胞的吞噬细胞在免疫系统中发挥重要作用。他们是负责发起的先天免疫反应和指挥后天免疫反应。通常情况下，经典激活巨噬细胞被激活IFNγ的或LPS，并有责任为消除病原体和安装的炎症反应1。相反，IL-4和IL-13激活或者激活巨噬细胞和炎症的决议过程中发挥在碎片中的作用，清除和组织重塑。专门的巨噬细胞在肠道保留其杀菌活性，但不装入一个亲炎症反应2。这种有益菌?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
这项工作得到了1“的研究资助津贴”的克隆氏病的和结肠炎加拿大基金会的LMS，谁是1消化科/加拿大协会健康研究/克罗恩的小号和结肠炎加拿大新研究者奖基金会加拿大协会的支持。
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number |
| Clodronate-containing liposomes | Clodronateliposomes.org | |
| PBS-containing liposomes | Clodronateliposomes.org | |
| Sterile PBS pH7.4 | Invitrogen | 14190 |
| IMDM | Invitrogen | 12440 |
| Fetal Calf Serum (FCS) | Invitrogen | 12483 |
| acetic acid | BDH Aristar | BDH3092-500MLP |
| Monothioglycerol (MTG) | Sigma | 96-275 |
| Recombinant murine MCSF | Stemcell Technologies | 02951 |
| Recombinant murine GM-CSF | Stemcell Technologies | 02935 |
| Recombinant murine IL-3 | Stemcell Technologies | 02903 |
| Recombinant murine IFNγ | Stemcell Technologies | 02746 |
| Recombinant murine IL-4 | Stemcell Technologies | 02714 |
| Cell Dissociation Buffer | Invitrogen | 13150-016 |
| Rat anti-F4/80 Antibody | AbD Serotec | MCA497GA |
| Mouse anti-ArgI Antibody | BD Transduction Laboratories | 610708 |
Table 1. Specific reagents used in this protocol.
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