Подготовка Awake мыши для записи нервных реакций и инъекционных Трейсеры
Summary
Электрофизиологические характеристики нейронов ответы важны для понимания функций мозга и направления размещения красители для отслеживания пути. Тем не менее, многие исследования проводятся под наркозом животным. Чтобы понять функции мозга без наркоза, мы разработали метод для записи свойств нейронов ответ и ввести красители в бодрствования мышь.
Abstract
Хорошо известно, что анестезия изменяет свойства нейронной реакции в различных регионах мозга. 13. В слуховой системе, фундаментальные свойства реакции нейронов мозга в том числе порог частоты специфику, и тормозных боковых меняются существенным образом под наркозом 1-2. Эти наблюдения побудили физиологи искать пути для записи из отдельных нейронов, не загрязняющие эффекты анестезии. Одним из результатов было децеребрационной подготовки, где мозга была полностью пересекаются на уровне среднего мозга 4. Недостатком этого препарата является грозным операции, ликвидации убывания проекции переднего мозга, а также невозможность использования сенсорной стимуляции для изучения структуры выше среднего мозга. Различные стратегии в том, чтобы имплантировать электроды массивов хронически записи из отдельных нейронов и многоквартирных кластеров в то время как животное бодрствует и / или поведения 5,6 </suр>. Эти методы, однако, не совместимы с употреблением инъекционных трассирующей краски после первого электрофизиологически характеризующих структуру мозга. Чтобы избежать изменения свойств нейронных ответ с анестетиков во время записи электрофизиологических свойств ответ от отдельных нейронов, мы адаптировали методику подголовник давно используют летучих мышей 7-9 до 10-12 мыши. Используя этот метод, мы можем проводить электрофизиологические записи в течение нескольких дней в ненаркотизированных мыши. В конце записи сессий, мы можем вводить краситель для восстановления расположения электродов и регистрации сайтов или вводить примеси так, что пути и из записи локусов может быть определена. Этот метод позволяет также изолировать одного нейрона записи в течение нескольких дней без использования анестезии.
Protocol
Discussion
Преимущество головой после удерживающей системы для электрофизиологических и нейроанатомических эксперимента у мышей является то, что эксперименты могут быть проведены с ненаркотизированных, проснись мышей, устранение возможного загрязнения ответ из-за обезболивающих препаратов. …
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Поддержке гранта NSF 0920060, NIH грант DC004395, NHMRC грант 1009482, NSW Управление по науке и медицинских исследований, а Гарнетт Passe и Родни Уильямс Мемориальный фонд.
Materials
| Name | Company | Catalogue number | Comments |
| Etch gel for cleaning skull prior to dental cement | Henry Schein | 101-5396 | 12/pk with 1.2 mL syringes |
| Primer for dental cement | Kerr Optibond | 25881 | 8 mL bottle |
| Adhesive for dental cement | Kerr Optibond | 25882 | 8 mL bottle |
| Applicators for dental cement | Kerr Optibond | 24680 | 200/pk |
| Dental Cement | Charisma, Heraeus Kulzer | 66000085 | 4gm Syringe Refill |
| Tungsten Rod (Ground Pin) | A-M Systems | 717200 | 0.010″ diameter |
| Economy UV Curing Light | Henry Schein | CU-80 | |
| Head-post | Built in-house | ||
| Mounting bar | Built in-house | ||
| Mounting block | Built in-house | ||
| Stereotaxic Frame | David Kopf Instruments | 902 | |
| Mouse and Neonatal Rat Adaptor | Stoelting | 51625 | |
| Deltaphase Isothermal Pad | Braintree Scientific, Inc. | 39DP |
References
- Evans, E. F., Nelson, P. G. The responses of single neurones in the cochlear nucleus of the cat as a function of their location and the anaesthetic state. Exp. Brain Res. 17, 402-427 (1973).
- Joris, P. X. Response classes in the dorsal cochlear nucleus and its output tract in the chloralose-anesthetized cat. J. Neurosci. 18, 3955-3966 (1998).
- Populin, L. C. Anesthetics change the excitation/inhibition balance that governs sensory processing in the cat superior colliculus. J. Neurosci. 25, 5903-5914 (2005).
- Young, E. D., Brownell, W. E. Responses to tones and noise of single cells in dorsal cochlear nucleus of unanesthetized cats. J. Neurophysiol. 39, 282-300 (1976).
- Donoghue, J. P. Contrasting properties of neurons in two parts of the primary motor cortex of the awake rat. Brain Res. , 333-3173 (1985).
- Westby, G. W., Wang, H. A floating microwire technique for multichannel chronic neural recording and stimulation in the awake freely moving rat. J. Neurosci. Methods. 76, 123-133 (1997).
- Suga, N., O’Neill, W. E., Manabe, T. Cortical neurons sensitive to combinations of information-bearing elements of biosonar signals in the mustache bat. Science. 200, 778-781 (1978).
- O’Neill, W. E., Suga, N. Target range-sensitive neurons in the auditory cortex of the mustache bat. Science. 203, 69-73 (1979).
- Suga, N., O’Neill, W. E., Manabe, T. Harmonic-sensitive neurons in the auditory cortex of the mustache bat. Science. 203, 270-274 (1979).
- Portfors, C. V., Felix, R. A. 2nd Spectral integration in the inferior colliculus of the CBA/CaJ mouse. Neuroscience. , 136-1159 (2005).
- Felix, R. A., Portfors, C. V. Excitatory, inhibitory and facilitatory frequency response areas in the inferior colliculus of hearing impaired mice. Hear Res. 228, 212-229 (2007).
- Portfors, C. V., Jonson, K. G., Roberts, P. D. Over-representation of species-specific vocalizations in the awake mouse inferior colliculus. Neuroscience. 162, 486-500 (2009).
- Franklin, K. B. J., Paxinos, G. . The Mouse Brain in Stereotaxic Coordinates. , (2007).
