إعداد الفأر استيقظ لتسجيل الردود العصبية وحقن الراسمات
Summary
توصيف الكهربية من الاستجابات العصبية مهم لفهم وظائف المخ ولتوجيه وضع الأصباغ لتتبع مسار. ومع ذلك، يتم تنفيذ العديد من الدراسات على الحيوانات تخدير. لفهم وظائف الدماغ من دون تخدير، طورنا طريقة لتسجيل العقارات استجابة الخلايا العصبية وحقن الأصباغ في الماوس مستيقظا.
Abstract
فمن المعروف أن التخدير يغير خصائص استجابة العصبية في مناطق مختلفة من الدماغ. 13. في النظام السمعي، يتم تغيير الخصائص الأساسية للاستجابة الخلايا العصبية الدماغ بما في ذلك الحد الأدنى، والنوعية تردد، وsidebands المثبطة في نواح هامة تحت التخدير 1-2. دفعت هذه الملاحظات فسيولوجي للبحث عن سبل لتسجيل واحدة من الخلايا العصبية من دون آثار تلوث من التخدير. وكان نتيجة واحدة استعدادا منزوع الدماغ، حيث كان مقطوع تماما الدماغ على مستوى المخ الأوسط 4. المآخذ على هذا الإعداد هي جراحة هائلة، والقضاء على النزول التوقعات من الدماغ الأمامي، وعدم القدرة على استخدام الحواس لدراسة هياكل فوق الدماغ المتوسط. وكانت استراتيجية مختلفة لزرع قطب كهربائي صفائف مزمن لتسجيل واحدة من الخلايا العصبية والتكتلات المتعددة الوحدات في حين يكون الحيوان مستيقظا و / أو التصرف 5،6 </suP>. لكن هذه التقنيات ليست متوافقة مع حقن الأصباغ التتبع بعد 1 تميز electrophysiologically بنية الدماغ. لتجنب تغيير خصائص استجابة العصبية مع التخدير أثناء تسجيل خصائص استجابة الخلايا العصبية الكهربية من واحد، وقد تكيفت لدينا أسلوب ضبط النفس رئيس استخدمت لفترة طويلة في الخفافيش 7-9 على الماوس 10-12. باستخدام هذه الطريقة، ونحن قادرون على إجراء التسجيلات الكهربية على مدى عدة أيام في الماوس unanesthetized. في نهاية جلسات تسجيل، يمكننا بعد ذلك حقن صبغة لإعادة بناء مواقف القطب ومواقع تسجيل أو حقن التتبع بحيث يمكن تحديد المسارات من وإلى مواضع تسجيل. هذا الأسلوب يسمح للعزل جيد التسجيلات عصبون واحد أكثر من عدة أيام من دون استخدام مواد التخدير.
Protocol
Discussion
في الاستفادة من نظام ضبط النفس وجها لآخر للتجارب الكهربية وتشريحي عصبي في الفأر هو أن يمكن إجراء تجارب على الفئران، unanesthetized مستيقظا، والقضاء على احتمال تلوث استجابة بسبب أدوية التخدير. وبالإضافة إلى ذلك، مجموعة يمكن أن تستخدم حتى خلال أيام عدة للسماح للاستخدام الحي…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
بدعم من منحة جبهة الخلاص الوطني 0920060، المعاهد الوطنية للصحة منح DC004395، NHMRC المنحة 1009482، مكتب نيو ساوث ويلز للعلوم والبحوث الطبية، وعتيق غارنيت ورودني وليامز مؤسسة النصب التذكاري.
Materials
| Name | Company | Catalogue number | Comments |
| Etch gel for cleaning skull prior to dental cement | Henry Schein | 101-5396 | 12/pk with 1.2 mL syringes |
| Primer for dental cement | Kerr Optibond | 25881 | 8 mL bottle |
| Adhesive for dental cement | Kerr Optibond | 25882 | 8 mL bottle |
| Applicators for dental cement | Kerr Optibond | 24680 | 200/pk |
| Dental Cement | Charisma, Heraeus Kulzer | 66000085 | 4gm Syringe Refill |
| Tungsten Rod (Ground Pin) | A-M Systems | 717200 | 0.010″ diameter |
| Economy UV Curing Light | Henry Schein | CU-80 | |
| Head-post | Built in-house | ||
| Mounting bar | Built in-house | ||
| Mounting block | Built in-house | ||
| Stereotaxic Frame | David Kopf Instruments | 902 | |
| Mouse and Neonatal Rat Adaptor | Stoelting | 51625 | |
| Deltaphase Isothermal Pad | Braintree Scientific, Inc. | 39DP |
References
- Evans, E. F., Nelson, P. G. The responses of single neurones in the cochlear nucleus of the cat as a function of their location and the anaesthetic state. Exp. Brain Res. 17, 402-427 (1973).
- Joris, P. X. Response classes in the dorsal cochlear nucleus and its output tract in the chloralose-anesthetized cat. J. Neurosci. 18, 3955-3966 (1998).
- Populin, L. C. Anesthetics change the excitation/inhibition balance that governs sensory processing in the cat superior colliculus. J. Neurosci. 25, 5903-5914 (2005).
- Young, E. D., Brownell, W. E. Responses to tones and noise of single cells in dorsal cochlear nucleus of unanesthetized cats. J. Neurophysiol. 39, 282-300 (1976).
- Donoghue, J. P. Contrasting properties of neurons in two parts of the primary motor cortex of the awake rat. Brain Res. , 333-3173 (1985).
- Westby, G. W., Wang, H. A floating microwire technique for multichannel chronic neural recording and stimulation in the awake freely moving rat. J. Neurosci. Methods. 76, 123-133 (1997).
- Suga, N., O’Neill, W. E., Manabe, T. Cortical neurons sensitive to combinations of information-bearing elements of biosonar signals in the mustache bat. Science. 200, 778-781 (1978).
- O’Neill, W. E., Suga, N. Target range-sensitive neurons in the auditory cortex of the mustache bat. Science. 203, 69-73 (1979).
- Suga, N., O’Neill, W. E., Manabe, T. Harmonic-sensitive neurons in the auditory cortex of the mustache bat. Science. 203, 270-274 (1979).
- Portfors, C. V., Felix, R. A. 2nd Spectral integration in the inferior colliculus of the CBA/CaJ mouse. Neuroscience. , 136-1159 (2005).
- Felix, R. A., Portfors, C. V. Excitatory, inhibitory and facilitatory frequency response areas in the inferior colliculus of hearing impaired mice. Hear Res. 228, 212-229 (2007).
- Portfors, C. V., Jonson, K. G., Roberts, P. D. Over-representation of species-specific vocalizations in the awake mouse inferior colliculus. Neuroscience. 162, 486-500 (2009).
- Franklin, K. B. J., Paxinos, G. . The Mouse Brain in Stereotaxic Coordinates. , (2007).
