الكشف عن العصبية علم الطوبوغرافيا في حلبة لون موضوع
Summary
ونحن نقدم دليلا عمليا لتقديم استشفاف<em> في الجسم الحي</em> واستخدام الممر السبيل النخاعي كنظام نموذج لشرح الخطوات الأساسية لنجاح تحليل الدوائر العصبية في الفئران. نحن لدينا وصف بالتفصيل تنوعا تتبع بروتوكول الذي يستغل القمح الجرثومية راصة (WGA) مترافق لfluorophores اليكسا.
Abstract
ويتم تنظيم الدوائر العصبية في الخرائط الطوبوغرافية وظيفية. من أجل تصور مجمع الدوائر العمارة وضعنا نهجا لموثوق تسمية الزخرفة العالمية للتوقعات طبوغرافية متعددة. المخيخ هو نموذج مثالي لدراسة الترتيب المنظم للدوائر العصبية. على سبيل المثال ، فقد أثبتت منظمة compartmental من ألياف المطحلب السبيل النخاعي ليكون نظاما لا غنى عنه لدراسة المطحلب الزخرفة الألياف. نحن أظهرت مؤخرا والتي يمكن استخدامها القمح الجرثومية راصة (WGA) مترافق لاليكسا 555 و 488 لتعقب السبيل النخاعي التوقعات الألياف المطحلب في البلدان النامية والفئران الكبار (وآخرون Reeber. 2011). تم العثور على ثلاث خصائص رئيسية تجعل WGA – أدوات اليكسا استشفاف مرغوب فيه لوصفها التوقعات العصبية. الأولى ، هي fluorophores اليكسا مكثفة لمعانها ويسمح للتصوير wholemount مباشرة بعد البحث عن المفقودين. الثانية ، WGA – اليكسا استشفاف تسمية مسار كامل لتطوير والعصبية projectio الكبارنانوثانية. وتنقل بسرعة الثالثة ، WGA – اليكسا استشفاف في الاتجاهين الوراء وتقدمي. هنا ، نحن تصف بالتفصيل كيفية تحضير الأدوات اللازمة استشفاف وغيرها ، وكيفية إجراء عملية جراحية لتعقب السبيل النخاعي وأفضل السبل لتتبع صورة التوقعات في ثلاثة أبعاد. باختصار ، نحن نقدم بروتوكول خطوة بخطوة البحث عن المفقودين التي ستكون مفيدة للفك رموز التنظيم والاتصال من الخرائط الفنية ليس فقط في المخيخ ولكن أيضا في القشرة ، الدماغ ، والحبل الشوكي.
Protocol
Discussion
وقد وصفت لنا التفاصيل الجراحية والتقنية اللازمة لنجاح البحث عن المفقودين وتغصن محواري به رواية الفلورسنت النهج القائم على التوقعات بسرعة لوضع العلامات العصبية في الفئران النامية والكبار. WGA ، باستخدام اليكسا نظهر كيف يمكن استخدام استشفاف وعلامات لتحليل طوبوغرافيا…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
وأيد هذا العمل من قبل المحقق الجديد بدء الأموال من كلية ألبرت اينشتاين للطب في جامعة يشيفا في RVS.
Materials
| Equipment/Reagents | Model/Catalogue number | Company |
| Bead sterilizer | Model Steri 250 Cat. # 18000-45 | Fine Science Tools |
| Cauterizer | Cat. # 18000-00 | Fine Science Tools |
| Borosilicate glass capillaries | Cat. # 300056 | Harvard Apparatus |
| Dual stage Glass Micropipette Puller | Model 001-PC-10 | Narishige |
| Micrometer syringe | Cat. # GS-1100 | Gilmont Instruments |
| Small Animal Stereotaxic Instrument | Model 940-A | Kopf Instrumentation |
| Electrode Manipulator | Model 960 | Kopf Instrumentation |
| Vetcare chamber | Cat. # 340508 | Harvard Apparatus |
| Heating Pad | Cat. # 341241 | Harvard Apparatus |
| Leica DFC360 FX camera | DFC360 FX | Leica |
| Leica DFC490 camera | DFC490 | Leica |
| Leica DM5500 microscope | DM5500 | Leica |
| Leica DFC3000 FX camera | DFC3000 FX | Leica |
| Leica MZ16 FA microscope | MZ16 FA | Leica |
| CY3 Filter | Model # 11600231 | Leica |
| FITC Filter | Model # 11513880 | Leica |
| A4 DAPI/UV filter | Model # 11504162 | Leica |
| Wheat germ agglutinin, Alexa Fluor 488 conjugate | Cat. #W11261 | Invitrogen |
| Wheat germ agglutinin, Alexa Fluor 555 conjugate | Cat. #W32464 | Invitrogen |
References
- Apps, R., Hawkes, R. Cerebellar cortical organization: a one-map hypothesis. Nat. Rev. Neurosci. 10, 670-681 (2009).
- Grishkat, H. L., Eisenman, L. M. Development of the spinocerebellar projection in the prenatal mouse. J. Comp. Neurol. 363, 93-108 (1995).
- Mesulam, M. . Tracing neural connections with horseradish peroxidase. , (1982).
- Reeber, S. L., Sillitoe, R. V. Patterned expression of a cocaine- and amphetamine regulated transcript (CART) peptide reveals complex circuit topography in the rodent cerebellar cortex. Journal of Comparative Neurology. , (2011).
- Reeber, S. L., Gebre, S. A., Sillitoe, R. V. Fluorescence mapping of afferent topography in three dimensions. Brain. Struct. Funct. , (2011).
- Sillitoe, R. V., Stephen, D., Lao, Z., Joyner, A. L. Engrailed homeobox genes determine the organization of Purkinje cell sagittal stripe gene expression in the adult cerebellum. J. Neurosci. 28, 12150-12162 (2008).
- Sillitoe, R. V., Vogel, M. W., Joyner, A. L. Engrailed homeobox genes regulate establishment of the cerebellar afferent circuit map. J. Neurosci. 30, 10015-10024 (2010).
- Vig, J., Goldowitz, D., Steindler, D. A., Eisenman, L. M. Compartmentation of the reeler cerebellum: segregation and overlap of spinocerebellar and secondary vestibulocerebellar fibers and their target cells. Neuroscience. 130, 735-744 (2005).
- Vogel, M. W., Prittie, J. Topographic spinocerebellar mossy fiber projections are maintained in the lurcher mutant. J. Comp. Neurol. 343, 341-351 (1994).
- Voogd, J., Broere, G., van Rossum, J. The medio-lateral distribution of the spinocerebellar projection in the anterior lobe and the simple lobule in the cat and a comparison with some other afferent fibre systems. Psychiatr. Neurol. Neurochir. 72, 137-151 (1969).
- Wu, H. S., Sugihara, I., Shinoda, Y. Projection patterns of single mossy fibers originating from the lateral reticular nucleus in the rat cerebellar cortex and nuclei. J. Comp. Neurol. 411, 97-118 (1999).
