Applicazione di un mouse legatura Patch Peyer Assay intestinale Loop per valutare assorbimento da parte delle cellule batteriche M

L'interno del nostro intestino è abitato con un numero enorme di batteri commensali. La superficie mucosa del tratto gastrointestinale è continuamente esposto a loro e, occasionalmente, agli agenti patogeni. L'intestino tessuto linfoide associato (GALT) svolgono un ruolo chiave per l'induzione della risposta immunitaria della mucosa di questi microbi ^{1, 2.} Per iniziare la risposta immunitaria delle mucose, gli antigeni della mucosa deve essere trasportato dal lume dell'intestino attraverso la barriera epiteliale organizzato in follicoli linfoidi come le placche di Peyer. Questo transcitosi antigene è mediata da cellule specializzate M epiteliali ^{3, 4.} Cellule M sono atipici cellule epiteliali che attivamente fagocitare macromolecole e microbi. A differenza delle cellule dendritiche (DC) e macrofagi, che gli antigeni target lisosomi per la degradazione, le cellule M principalmente transcytose gli antigeni interiorizzato. Questo transcitosi macromolecolari vigoroso attraverso le cellule M fornisce l'antigene al sottostante follicoli linfoidi organizzato unod si crede di essere indispensabile per l'avvio della mucosa risposte immunitarie antigene-specifiche. Tuttavia, i meccanismi molecolari alla promozione di questo assorbimento dell'antigene da parte delle cellule M sono in gran parte sconosciuti. Abbiamo già riferito che la glicoproteina 2 (Gp2), in particolare espressi sulla membrana plasmatica apicale delle cellule M tra enterociti, serve come un recettore transcytotic per un sottoinsieme di commensale e di enterobatteri patogeni, tra cui l'Escherichia coli e Salmonella enterica sierotipo Typhimurium (S. Typhimurium ), riconoscendo FimH, un componente di tipo I pili sulla membrana batterica esterna ^5. Qui vi presentiamo un metodo per l'applicazione di test patchare una Peyer mouse ad anello per valutare l'assorbimento intestinale batterica da parte delle cellule M. Questo metodo è una versione migliorata del test intestinale ciclo del mouse descritto in precedenza ^{6, 7.} I punti migliori sono le seguenti: 1. Isoflurano è stato usato come agente anestetico. 2. Circa 1 cm legatura compresi anse intestinalipatch di ING Peyer è stato istituito. 3. I batteri captata dalle cellule M sono state marcate da reagente etichettatura fluorescenza o con iperespressione delle proteine ​​fluorescenti, come la proteina fluorescente verde (GFP). 4. Cellule M nel follicolo-associato epitelio che copre patch di Peyer sono stati rilevati in diretta integrale con montaggio immunostainig con anticorpi anti GP2. 5. Fluorescenti transcitosi batterica da parte delle cellule M sono stati osservati da analisi al microscopio confocale. La patch di Peyer mouse test ciclo intestinale potrebbe fornire la risposta che tipo di batteri patogeni o commensali transcytosed da parte delle cellule M, e può portarci a comprendere il meccanismo molecolare di come stimolare il sistema immunitario della mucosa attraverso le cellule M.