Summary

Singolo Drosophila Ommatidium Dissection e Imaging

Published: August 19, 2011
doi:

Summary

Il fattore limitante l'uso degli adulti<em> Drosophila</emOcchio> per studiare neurodegenerazione e biologia cellulare è l'imaging difficile dei processi intracellulari. Descriviamo la dissezione dei singoli ommatidi per generare una buona fede colture primarie di cellule neuronali, che possono essere soggetti a trattamento farmacologico e di imaging avanzate.

Abstract

La mosca della frutta Drosophila melanogaster ha dato un contributo inestimabile alla ricerca neuroscientifica ed è stato ampiamente utilizzato come modello per le malattie neurodegenerative a causa della sua potente genetica 1. L'occhio vola in particolare è stato l'organo di scelta per la ricerca neurodegenerazione, essendo la parte più accessibile e di vita indispensabili del sistema nervoso Drosophila. Ma l'avvertimento principale degli occhi intatto è la difficoltà, a causa della intensa autofluorescenza del pigmento, in eventi di imaging intracellulari, come autofagia dinamica 2, che sono di primaria importanza per la comprensione della neurodegenerazione.

Recentemente abbiamo usato la dissezione e la cultura dei singoli ommatidi 3 che è stato essenziale per la comprensione delle disfunzioni autofagici in un modello di volo Dentatorubro-Pallidoluysian Atrofia (DRPLA) 3, 4.

Ora segnalare una descrizione completa di questa tecnica (Fig. 1), adattato da studi elettrofisiologici 5, che rischia di ampliare notevolmente la possibilità di modelli di volo per neurodegenerazione. Questo metodo può essere adattato a vivere immagine eventi subcellulare e per monitorare la somministrazione efficace farmaco su cellule fotorecettrici (Fig. 2). Se usato in combinazione con tecniche di mosaico 6-8, le risposte di cellule geneticamente diverse possono essere analizzati in parallelo (Fig. 2).

Protocol

1. Dissezione della retina Drosophila Riempire un pozzo di un 3-Bene vetrino con tampone fosfato (PBS 1X), e poi anestetizzare vola da CO 2. Sia i maschi che le femmine possono essere utilizzati per questo esperimento. Una volta che le mosche sono anestetizzati, prendere una mosca con pinze e inseritelo nel piccolo piatto di PBS. In un ambito di dissezione, pizzicare la proboscide con una pinza, e poi staccare la testa dal corpo eliminando il collo con una seconda serie…

Discussion

La dissezione ommatidium singolo presentato qui permette la raccolta di informazioni delle cellule più profonde sui processi biologici come la neurodegenerazione, quando modellato negli occhi Drosophila. I neuroni dei fotorecettori sono più facilmente accessibili di altri neuroni e citoplasma è particolarmente grande, e quindi adatto per studiare la dinamica delle vescicole, nelle cellule stesse utilizzate proficuamente in molti modelli di quantificare neurodegenerazione in vivo. L'aspetto criti…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Ringraziamo Bernard Charroux per le discussioni. Questo lavoro è stato finanziato dalla Scuola LKC biomedica.

Materials

Name of the reagent Company Catalogue number Comments (optional)
Portable CO2 Dispenser Flystuff 59-150 Refills also available
DUMONT Tweezer No 5 AGAR Scientific T5034  
3-Well Glass Slide EMS 71561-01  
Micro scissors VWR HAMMHSB516-09  
Schneider’s Medium VWR 733-1663  
LysoTracker Red DND-99 Invitrogen L7528  
Superfrost Slides VWR 631-0108  
Vectashield with Dapi Vector Labs H-1200  
Coverslips VWR 631-1336  

References

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Cite This Article
Volpi, V., Mackay, D., Fanto, M. Single Drosophila Ommatidium Dissection and Imaging. J. Vis. Exp. (54), e2882, doi:10.3791/2882 (2011).

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