Il fattore limitante l'uso degli adulti<em> Drosophila</emOcchio> per studiare neurodegenerazione e biologia cellulare è l'imaging difficile dei processi intracellulari. Descriviamo la dissezione dei singoli ommatidi per generare una buona fede colture primarie di cellule neuronali, che possono essere soggetti a trattamento farmacologico e di imaging avanzate.
La mosca della frutta Drosophila melanogaster ha dato un contributo inestimabile alla ricerca neuroscientifica ed è stato ampiamente utilizzato come modello per le malattie neurodegenerative a causa della sua potente genetica 1. L'occhio vola in particolare è stato l'organo di scelta per la ricerca neurodegenerazione, essendo la parte più accessibile e di vita indispensabili del sistema nervoso Drosophila. Ma l'avvertimento principale degli occhi intatto è la difficoltà, a causa della intensa autofluorescenza del pigmento, in eventi di imaging intracellulari, come autofagia dinamica 2, che sono di primaria importanza per la comprensione della neurodegenerazione.
Recentemente abbiamo usato la dissezione e la cultura dei singoli ommatidi 3 che è stato essenziale per la comprensione delle disfunzioni autofagici in un modello di volo Dentatorubro-Pallidoluysian Atrofia (DRPLA) 3, 4.
Ora segnalare una descrizione completa di questa tecnica (Fig. 1), adattato da studi elettrofisiologici 5, che rischia di ampliare notevolmente la possibilità di modelli di volo per neurodegenerazione. Questo metodo può essere adattato a vivere immagine eventi subcellulare e per monitorare la somministrazione efficace farmaco su cellule fotorecettrici (Fig. 2). Se usato in combinazione con tecniche di mosaico 6-8, le risposte di cellule geneticamente diverse possono essere analizzati in parallelo (Fig. 2).
La dissezione ommatidium singolo presentato qui permette la raccolta di informazioni delle cellule più profonde sui processi biologici come la neurodegenerazione, quando modellato negli occhi Drosophila. I neuroni dei fotorecettori sono più facilmente accessibili di altri neuroni e citoplasma è particolarmente grande, e quindi adatto per studiare la dinamica delle vescicole, nelle cellule stesse utilizzate proficuamente in molti modelli di quantificare neurodegenerazione in vivo. L'aspetto criti…
The authors have nothing to disclose.
Ringraziamo Bernard Charroux per le discussioni. Questo lavoro è stato finanziato dalla Scuola LKC biomedica.
Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
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Portable CO2 Dispenser | Flystuff | 59-150 | Refills also available |
DUMONT Tweezer No 5 | AGAR Scientific | T5034 | |
3-Well Glass Slide | EMS | 71561-01 | |
Micro scissors | VWR | HAMMHSB516-09 | |
Schneider’s Medium | VWR | 733-1663 | |
LysoTracker Red DND-99 | Invitrogen | L7528 | |
Superfrost Slides | VWR | 631-0108 | |
Vectashield with Dapi | Vector Labs | H-1200 | |
Coverslips | VWR | 631-1336 |