Summary

Simple Drosophile Dissection ommatidie et imagerie

Published: August 19, 2011
doi:

Summary

Le facteur limitant dans l'utilisation de l'adulte<em> Drosophile</emOeil> pour étudier la neurodégénérescence et de biologie cellulaire est l'imagerie difficile de processus intracellulaires. Nous décrivons la dissection des ommatidies simple pour générer un bona fide culture primaire de cellules neuronales, qui peut être soumis à un traitement médicamenteux et d'imagerie de pointe.

Abstract

La mouche des fruits Drosophila melanogaster a apporté une contribution inestimable à la recherche en neurosciences et a été largement utilisée comme modèle pour les maladies neurodégénératives en raison de sa puissante génétique 1. L'œil de la mouche en particulier, a été l'organe de choix pour la recherche neurodégénérescence, étant la partie la plus accessible et la vie-dispensable de la drosophile système nerveux. Cependant la mise en garde importante des yeux intacts, c'est la difficulté, à cause de l'autofluorescence intense du pigment, dans les événements d'imagerie intracellulaire, telles que l'autophagie dynamiques 2, qui sont primordiales pour la compréhension de la neurodégénérescence.

Nous avons récemment utilisé la dissection et la culture du seul ommatidies 3 qui a été essentielle pour notre compréhension des dysfonctionnements autophagie dans un modèle de vol du Dentatorubro-pallido Atrophie (DRPLA) 3, 4.

Nous avons maintenant le rapport une description complète de cette technique (fig. 1), adapté de 5 études électrophysiologiques, qui est susceptible d'augmenter considérablement la possibilité de voler pour les modèles neurodégénérescence. Cette méthode peut être adaptée aux images en direct des événements subcellulaire et de surveiller l'administration de médicaments efficaces sur les cellules photoréceptrices (Fig. 2). Si elle est utilisée en combinaison avec 6-8 techniques de mosaïque, les réponses des cellules génétiquement différentes peuvent être dosés en parallèle (Fig. 2).

Protocol

1. Dissection de la rétine chez la drosophile Remplir un puits d'une lame de verre 3 puits avec du tampon phosphate salin (PBS 1X), puis par les mouches anesthésier CO 2. Les mâles et les femelles peuvent être utilisés pour cette expérience. Une fois que les mouches sont anesthésiés, ramasser une seule mouche à l'aide de pinces et le déposer dans le petit plat de PBS. Sous un microscope à dissection, pincez la trompe avec une pince, puis détacher la …

Discussion

La dissection ommatidie seule présentée ici permet de collecter des informations plus profondes sur les processus biologiques cellulaires, comme la neurodégénérescence, quand modélisés dans l'œil de drosophile. Les neurones photorécepteurs sont plus facilement accessibles que d'autres neurones et ils cytoplasme est particulièrement importante, et donc adapté pour étudier la dynamique des vésicules, dans les cellules mêmes utilisé avec compétence dans de nombreux modèles pour quantifier …

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Nous remercions Bernard Charroux pour les discussions. Ce travail a été financé par l'École KCL biomédicale.

Materials

Name of the reagent Company Catalogue number Comments (optional)
Portable CO2 Dispenser Flystuff 59-150 Refills also available
DUMONT Tweezer No 5 AGAR Scientific T5034  
3-Well Glass Slide EMS 71561-01  
Micro scissors VWR HAMMHSB516-09  
Schneider’s Medium VWR 733-1663  
LysoTracker Red DND-99 Invitrogen L7528  
Superfrost Slides VWR 631-0108  
Vectashield with Dapi Vector Labs H-1200  
Coverslips VWR 631-1336  

References

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  11. Zou, S., Meadows, S., Sharp, L., Jan, L. Y., Jan, Y. N. Genome-wide study of aging and oxidative stress response in Drosophila melanogaster. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 97, 13726-13731 (2000).

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Cite This Article
Volpi, V., Mackay, D., Fanto, M. Single Drosophila Ommatidium Dissection and Imaging. J. Vis. Exp. (54), e2882, doi:10.3791/2882 (2011).

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