El factor limitante en el uso de los adultos<em> Drosophila</emLos ojos> para estudiar la neurodegeneración y la biología celular es la imagen difícil de procesos intracelulares. Se describe la disección de omatidios solo para generar una bona-fide cultivo primario de células neuronales, que pueden ser sometidos a un tratamiento de drogas y de imagen avanzada.
La mosca de la fruta Drosophila melanogaster ha hecho valiosas contribuciones a la investigación en neurociencias y ha sido utilizado ampliamente como un modelo para las enfermedades neurodegenerativas por su poderosa genética 1. El ojo de la mosca, en particular, ha sido el órgano de elección para la investigación neurodegeneración, siendo la parte más accesible y la vida puede prescindir de la Drosophila sistema nervioso. Sin embargo, la principal advertencia de los ojos intactos, es la dificultad, debido a la intensa autofluorescencia de los pigmentos, en los eventos de formación de imágenes intracelulares, como la dinámica de la autofagia 2, que son fundamentales para la comprensión de la neurodegeneración.
Recientemente, hemos utilizado la disección y la cultura de un solo omatidios 3 que ha sido esencial para nuestra comprensión de las disfunciones autofagia en un modelo de vuelo de Dentatorubro-Pallidoluysian atrofia (DRPLA) 3, 4.
Ahora el informe una descripción completa de esta técnica (Fig. 1), una adaptación de los estudios electrofisiológicos 5, que es probable que se expanda enormemente la posibilidad de volar por los modelos de neurodegeneración. Este método puede ser adaptado a la imagen en vivo eventos subcelulares y para supervisar la administración de fármacos eficaces en las células fotorreceptoras (Fig. 2). Si se utiliza en combinación con las técnicas del mosaico de 6-8, las respuestas de las células genéticamente diferentes se analizaron en paralelo (Fig. 2).
La disección omatidio único que aquí se presenta permite la recolección de información de celda más profunda sobre los procesos biológicos como la neurodegeneración, cuando el modelo en el ojo de Drosophila. Las neuronas fotorreceptoras son más accesibles que otras neuronas y el citoplasma es muy grande, y por lo tanto adecuado para estudiar la dinámica de la vesícula, en las células del mismo utilizado eficientemente en muchos modelos para cuantificar la neurodegeneración en vivo. El aspe…
The authors have nothing to disclose.
Damos las gracias a Bernard Charroux para los debates. Este trabajo fue financiado por la Escuela de Biomédica ley de Kirchhoff.
Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
---|---|---|---|
Portable CO2 Dispenser | Flystuff | 59-150 | Refills also available |
DUMONT Tweezer No 5 | AGAR Scientific | T5034 | |
3-Well Glass Slide | EMS | 71561-01 | |
Micro scissors | VWR | HAMMHSB516-09 | |
Schneider’s Medium | VWR | 733-1663 | |
LysoTracker Red DND-99 | Invitrogen | L7528 | |
Superfrost Slides | VWR | 631-0108 | |
Vectashield with Dapi | Vector Labs | H-1200 | |
Coverslips | VWR | 631-1336 |