وحيد ذبابة الفاكهة Ommatidium تشريح والتصوير
Summary
عامل يحد من استخدام الكبار<em> ذبابة الفاكهة</em> العين لدراسة تنكس عصبي وبيولوجيا الخلية هو صعوبة التصوير من العمليات داخل الخلايا. وصفنا تشريح ommatidia واحدة لإنشاء النية الحسنة ، زراعة الخلايا العصبية الأولية ، والتي يمكن أن تخضع للعلاج بالعقاقير والتصوير المتقدمة.
Abstract
جعلت ذبابة الفاكهة ذبابة الفاكهة السوداء البطن مساهمات لا تقدر بثمن للبحث علم الأعصاب ، واستخدمت على نطاق واسع كنموذج للأمراض العصبية بسبب الوراثة القوية 1. وقد عين الذبابة لا سيما الجهاز المفضل للبحوث تنكس عصبي ، ويجري الجزء الأكثر الوصول إليها والاستغناء عنها ، من حياة النظام العصبي ذبابة الفاكهة. لكن التحذير من العيون كبرى سليمة هو صعوبة ، وذلك بسبب تألق ذاتي مكثفة من الصباغ ، والأحداث في التصوير داخل الخلايا ، مثل ديناميات 2 الالتهام الذاتي ، والتي لها أهمية قصوى لفهم تنكس عصبي.
لقد اعتدنا في الآونة الأخيرة تشريح وثقافة واحدة ommatidia 3 التي كانت ضرورية لفهمنا للاختلالات autophagic في نموذج يطير من Dentatorubro – Pallidoluysian الضمور (DRPLA) 3 ، 4.
نحن الآن التقرير وصفا شاملا لهذه التقنية (الشكل 1) ، وتكييفها من الدراسات الكهربية 5 ، التي من المرجح أن يتوسع بشكل كبير في إمكانية نماذج الطيران لتنكس عصبي. ويمكن تكييف هذه الطريقة لصورة حية الأحداث التحت خلوية ، ورصد فعالية الدواء على خلايا مستقبلة للضوء (الشكل 2). إذا استعملت في تآلف مع تقنيات الفسيفساء 6-8 ، يمكن أن يعاير ردود الخلايا المختلفة وراثيا بشكل متواز (الشكل 2).
Protocol
Discussion
تشريح ommatidium احدة المعروضة هنا يمكن جمع معلومات أكثر عمقا حول الخلية البيولوجية مثل العمليات تنكس عصبي ، عندما غرار ذبابة الفاكهة في العين. الخلايا العصبية مستقبلة للضوء أكثر يمكن الوصول إليها بسهولة من الخلايا العصبية الأخرى ، وأنهم السيتوبلازم كبيرة على …
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
نشكر برنار Charroux للمناقشات. وقد تم تمويل هذا العمل من قبل المدرسة الطبية بوكل.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
|---|---|---|---|
| Portable CO2 Dispenser | Flystuff | 59-150 | Refills also available |
| DUMONT Tweezer No 5 | AGAR Scientific | T5034 | |
| 3-Well Glass Slide | EMS | 71561-01 | |
| Micro scissors | VWR | HAMMHSB516-09 | |
| Schneider’s Medium | VWR | 733-1663 | |
| LysoTracker Red DND-99 | Invitrogen | L7528 | |
| Superfrost Slides | VWR | 631-0108 | |
| Vectashield with Dapi | Vector Labs | H-1200 | |
| Coverslips | VWR | 631-1336 |
References
- Marsh, J. L., Thompson, L. M. Drosophila in the study of neurodegenerative disease. Neuron. 52, 169-178 (2006).
- Mizushima, N., Levine, B., Cuervo, A. M., Klionsky, D. J. Autophagy fights disease through cellular self-digestion. Nature. 451, 1069-1075 (2008).
- Nisoli, I. Neurodegeneration by polyglutamine Atrophin is not rescued by induction of autophagy. Cell Death Differ. 17, 1577-1587 (2010).
- Charroux, B., Fanto, M. The fine line between waste disposal and recycling: DRPLA fly models illustrate the importance of completing the autophagy cycle for rescuing neurodegeneration. Autophagy. 6, 667-669 (2010).
- Hardie, R. C. Voltage-sensitive potassium channels in Drosophila photoreceptors. J Neurosci. 11, 3079-3095 (1991).
- Lee, T., Luo, L. Mosaic analysis with a repressible cell marker (MARCM) for Drosophila neural development. Trends in neurosciences. 24, 251-254 (2001).
- Xu, T., Rubin, G. M. Analysis of genetic mosaics in developing and adult Drosophila tissues. Development. 117, 1223-1237 (1993).
- Gambis, A., Dourlen, P., Steller, H., Mollereau, B. Two-color in vivo imaging of photoreceptor apoptosis and development in Drosophila. Dev Biol. 351, 128-1234 (2011).
- Napoletano, F. Polyglutamine Atrophin provokes neurodegeneration in Drosophila by repressing fat. The EMBO journal. 30, 945-958 (2011).
- Ravikumar, B. Inhibition of mTOR induces autophagy and reduces toxicity of polyglutamine expansions in fly and mouse models of Huntington disease. Nature. 36, 585-595 (2004).
- Zou, S., Meadows, S., Sharp, L., Jan, L. Y., Jan, Y. N. Genome-wide study of aging and oxidative stress response in Drosophila melanogaster. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 97, 13726-13731 (2000).
