Evisceration стекловидного тела и сетчатки мышь для протеомных Анализы
Summary
Рассечение техника иллюстрирует потрошения стекловидного тела, сетчатки и объектив от мыши глаз, разделение центрифугированием, и характеристика с белком анализов.
Abstract
В то время как мыши сетчатки стала важной генетической модели унаследовали заболевания сетчатки, стекловидного мыши еще предстоит изучить. Стекловидного является высоко водный внеклеточного матрикса вышележащих сетчатки, где внутриглазное а также экстраокулярных белки накапливаются во время болезни. 1-3 Аномальные взаимодействия между стекловидного тела и сетчатки лежат в основе ряда заболеваний, таких как отслойка сетчатки, пролиферативная диабетическая ретинопатия, увеит, и пролиферативной витреоретинопатия 1. , 4 относительного объема стекловидного мыши существенно меньше, чем человеческие стекловидное (рис. 1), поскольку мышь объектив занимает почти 75% ее глаза. 5 Это сделало биохимических исследований мыши стекловидного сложной задачей. В этом видео статьи, мы представляем технику препарировать и изолировать мыши стекловидного от сетчатки, которая позволит использовать трансгенных моделей мыши, чтобы более четко определить роль этого внеклеточного матрикса в развитии витреоретинальной заболеваний.
Protocol
Discussion
Трансгенные мыши являются важной моделью для исследования сетчатки и витреоретинальной болезни. 6-10 тела мыши стекловидного тела, однако, включает в себя значительно меньшую долю глаза по сравнению с человеческой стекловидного из-за большого линзы в глаз мыши 5. Это делает его трудно выделить и очистить мышь стекловидного тела. Понимание белка изменения, связанные с стекловидного во время болезни, такие как пролиферативная диабетическая ретинопатия, возрастной макулярной дегенерации, увеит, отслойка сетчатки и даст понимание механизмов, посредством которых они прогрессируют. Это визуализируется экспериментальный протокол предоставляет возможность получить и очистить тело мыши стекловидное тело, при максимальном выход белка для ферментативных и протеомных анализов.
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Финансирование было предоставлено Борьба за зрение и исследований в области профилактики слепоты.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
|---|---|---|---|
| 15°, BD Beaver Microsurgical Blade | Becton-Dickinson | 374881 | |
| PBS, pH 7.4 | Invitrogen | 70011-044 | |
| 0.22 Fine-Castroviejo Suturing Forceps | Storz Ophthalmics | E1805 | |
| 0.12 Colibri forceps | Storz Ophthalmics | 2/132 | |
| Microcon Centrifugal Filter Ultracel YM-100 or YM-50 | Millipore | 42412, 42415 | |
| SOD Activity Colorimetric Assay Kit | Abcam | Ab65354 | |
| Weck-Cel surgical spears | Medtronic | 0008680 | |
| Protease inhibitor cocktail | Roche | 11 836 170 001 | |
| Flamingo fluorescent gel stain | Bio-Rad | 161-04910 |
References
- Bishop, P. N. Structural macromolecules and supramolecular organisation of the vitreous gel. Prog. Retin. Eye Res. 19, 323-344 (2000).
- Gao, B. B., Chen, X., Timothy, N., Aiello, L. P. &. a. m. p. ;. a. m. p., Feener, E. P. Characterization of the vitreous proteome in diabetes without diabetic retinopathy and diabetes with proliferative diabetic retinopathy. J. Proteome Res. 7, 2516-2525 (2008).
- Izuta, H. Extracellular SOD and VEGF are increased in vitreous bodies from proliferative diabetic retinopathy patients. Mol. Vis. 15, 2663-2672 (2009).
- Sebag, J. Molecular biology of pharmacologic vitreolysis. Trans. Am. Ophthalmol. Soc. 103, 473-494 (2005).
- Smith, R. S., Smith, R. S., John, S. W. M., Nishina, P. M., Sundberg, J. P. . Systematic evaluation of the mouse eye: Anatomy, pathology, and biomethods. , 161-195 (2002).
- Ihanamaki, T., Metsaranta, M., Rintala, M., Vuorio, E., Sandberg-Lall, M. Ocular abnormalities in transgenic mice harboring mutations in the type II collagen gene. Eur. J. Ophthalmol. 6, 427-435 (1996).
- Kaarniranta, K. A mouse model for Stickler’s syndrome: ocular phenotype of mice carrying a targeted heterozygous inactivation of type II (pro)collagen gene (Col2a1. Exp. Eye Res. 83, 297-303 (2006).
- Marneros, A. G. &. a. m. p. ;. a. m. p., Olsen, B. R. Age-dependent iris abnormalities in collagen XVIII/endostatin deficient mice with similarities to human pigment dispersion syndrome. Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 44, 2367-2372 (2003).
- Martin, A. C. Pathogenesis of persistent hyperplastic primary vitreous in mice lacking the arf tumor suppressor gene. Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 45, 3387-3396 (2004).
- Song, B. J., Tsang, S. H., Lin, C. S. Genetic models of retinal degeneration and targets for gene therapy. Gene. Ther. Mol. Biol. 11B, 229-262 (2007).
- Skeie, J. M., Mahajan, V. B. Dissection of Human Vitreous Body Elements for Proteomic Analysis. J Vis Exp. , (2011).
- Ciechanowski, K. Impaired synthesis is not the reason for decreased activity of extracellular superoxide dismutase in patients with diabetes. Arch Med Res. 36, 148-153 (2005).
