איפוק ידני ומסלולי מנהל מתחם נפוצים בעכברים וחולדות
Summary
עבודה בצורה בטוחה ואנושית עם מכרסמי מחקר דורשת מיומנות ליבה בשיטות טיפול ובאיפוק. מאמר זה יציג את העקרונות הבסיסיים הנדרשים לטיפול בצורה בטוחה ויעילים לנהל תרכובות לעכברים וחולדות.
Abstract
היכולת הבטוחה ויעילה לריסון עכברים וחולדות היא חלק חשוב של מחקר. עבודה בביטחון ובאנושיות עם עכברים וחולדות דורשת מיומנות בסיסית בשיטות טיפול ובאיפוק. מאמר זה יציג את העקרונות הבסיסיים הנדרשים לטיפול בבעלי חיים בבטחה. בשתי ידות, ואיפוק ביד אחת, עם חפצי ריסון תוכננו במיוחד יומחש. לעתים קרובות, חלק אחר של המחקר או בדיקה של השימוש בבעלי חיים הוא הממשל היעיל של תרכובות לעכברים וחולדות. למרות שיש מספר רב של מסלולים אפשריים ניהול (מוגבל רק על ידי הגודל והאיברים של בעלי החיים), רובם לא השתמשו באופן קבוע במחקר. וידאו זה מדגים כמה מהמסלולים הנפוצים יותר, לרבות תוך ורידים, תוך שרירית, תת עורית, וgavage האוראלי. המטרה של מאמר זה היא לחשוף את צופה מכירה את הטכניקות האלה לאיפוק בסיסי ונתיבי ממשל בסמים. וידאו זהלא מחליף ידות על הכשרה נדרשות במתקן שלך, אך נועד כדי להגדיל ולהשלים את ההכשרה הזאת.
Protocol
Discussion
פרוטוקול זה יש לראות כמבוא לטיפול בבעלי חיים וממשל חומר שנועד להשלים את הידות על אימונים ספקו במתקן של החוקר. אמצעי הריסון שישמש ואת המסלולים של ממשל חומר יש לשקול בעיצוב הניסיון וכאשר המחקר או פרוטוקול ועדת אתיקת הפרוטוקול כתוב.
הדרכה בנהלים הקשורים לבעלי חיים היא חיונית להצלחתו של מחקר. כדי לבצע את רוב הניסויים, בעלי חיים חייבים להיות מטופלים על ידי צוות מחקר, וטיפול בבעלי החיים הטוב יותר, פחות לחוץ בעלי החיים 3. הרגיל את בעלי חיים למגע אנושי עדין יכול להפחית את הלחץ ולעשות חי נבדקים צייתנים יותר 4,5. מתח טיפול הוכח להשפיע על כמה סוגים של 6 מחקר וזה אפשרי זה יכול להשפיע גם על אחרים. איפוק של מכרסמים צריך להתבצע בזהירות, אבל טיפול חברה (לא סופיאחיזה עשויה לגרום לפציעה למכרסם ומטפל) וצריכה להיות לכל תקופה הקצרה ביותר המעשית. שיטות ריסון בדרך כלל נבחרו על סמך גודלו של בעל החיים או הגישה בקשה. לדוגמה, טיפול בחולדות בוגרות בעורפו, אם כי ניתן, לעתים קרובות נתקל בהתנגדות חזקה של העכברוש, במיוחד אם המטפל הוא חסר ניסיון. מחזיק עכבר או חולדה ביד יכולה להפוך את הגישה לורידי הזנב קשה ומכשיר איפוק לעתים קרובות בחר לשמור את החיה בשקט ככל האפשר.
כאשר חוקרים להתמודד עם בעלי חיים, לעתים קרובות הם מבקשים לנהל את מתחם או ביולוגי למחקר נוסף. המסלול של מתן חומרים יכול להשפיע על קליטה, זמינותו ביולוגית, והתאמת לניסוי מסוים. היכרות עם מסלולים שונים צריכה לספק לחוקרים עם היכולת לניהול החומר שלהם בצורה הטובה ביותר האפשרית עבור המחקר שלהם. לדוגמה, במסלול שמקדם ספיגה מהירה של חומר, כמו ורידים או intraperitoneal, אין להשתמש אם החוקר רוצה לנהל את החומר באופן איטי יותר טווח. הביקורות האחרונות של חלק מהטכניקות האלה ושיקולים לנפח, ציוד, ומומס ניתן למצוא בשני מסמכים של טרנר ואח'. 1,7
בכל פעם שהם חומרים שניתן למכרסמים במעבדה, יש להתחשב בגודל הנכון של ציוד ונפח של חומר (המפורטים בטבלה 1). כיאות ציוד בגודל או בכמויות גדולות עלול לגרום לחוסר נוחות, פציעה או מוות של בעל החיים. באופן כללי, חומרים המנוהלים parenterally הם עקרים, אלא אם מטרות המחקר היינו להפוך את זה בלתי אפשרי (כלומר, מחקרי חיידקים). תרכובות ביולוגיות וצריכות להיות במומס או רכב שתהיה ההשפעה לפחות על החיה. PH פיסיולוגי (7.3 -7.4) הוא מקובל היטב, במיוחד עבור תת עורית, תוך שרירית, וintrapeמסלולי ritoneal. רמות ה-pH ללא פיסיולוגיות בחומרים המנוהלים על ידי נתיבים אלו עלולות לגרום לכאב או נימק וניזק לרקמות. טווחים רחבים של pH נסבלים עם מסלולי intragastric ווריד 7. במכרסמים קטנים, שיקול חשוב נוסף הוא האפשרות של מצמרר אם כמויות גדולות של נוזלים בטמפרטורת חדר מקבלות. אם נוזלים מתבצעים בהזרקה לוריד או intraperitoneally, במיוחד בתמיכה של בעלי חיים חולים, הם צריכים להיות חממו לטמפרטורת גוף (37 מעלות צלזיוס).
את המסלולים של ממשל שנדונו בפרוטוקול זה הם אלה ששמשו בדרך כלל בתכניות מחקר רבות, הם פשוטים להורים, ובדרך כלל לא דורש הרדמה. מגוון כמעט אינסופי של מסלולים של ממשל הוא אפשרי, עם זאת, כולל תוך גולגולתי, intrathecal, אפידורל, intratracheal, intraosseous, וintraarticular אבל לתת שם כמה. הדרכה במסלולים מיוחדים אלה של ממשל צריכה להיות בקשה מאנשי WHo יש ניסיון רב עם המסלול ותוצאות טובות.
במכרסמים, המסלול אפי משמש בדרך כלל כדי ללמוד חומרים שהוכנסו לריאות דרך "טבעית" יותר; שיטה מהחדרת intratracheal. עכברים וחולדות הם נושמים אף מחייבים את, כך שפיתו אותם לשאוף כמויות קטנות מאוד של נוזל זה לא קשה, גם בבעלי חיים מודעים. מאז רירית האף היא מצוידת היטב בכלי דם, מנהל אפי של כמה חומרים יכול להיות דומה לעירוי לוריד. מסלול זה אינו מומלץ בבעלי חיים עם נזלת, עם זאת, כפי שעלול לפגוע בספיגה. ניסיונות לנהל כמויות גדולות על ידי התוואים אפי עלולים לגרום לקוצר נשימה או בטביעתו של בעל החיים.
זריקות תוך שרירית לספק ספיגה מהירה של חומרים. זריקות לשריר יכולות להיות מאתגרות בחולדות ועכברים, בשל גודלם הקטן והשרירים בהתאמה קטנים. הם מבוצעים ברגל האחוריתs. בשל הפוטנציאל לניזק של עצב הירך, femoris הארבעה הראשיים הוא השריר של בחירה.
למרות שגם תת עורית ומסלולי intradermal כרוך בעור, יש הבדלים בין הזמינות הביולוגית של חומרים הממוקמים בעור לעומת subcutis. תת עורית ממשל נחשב לעתים קרובות מסלול "תצהיר", עם ספיגה איטית יותר ממסלולים אחרים, כגון תוך ורידית או intraperitoneal. ממשל intradermal משמש לנפחים קטנים מאוד של חומרים, בדרך כלל חומרי immunostimulatory כגון תערובות אדג'ובנט-אנטיגן. בשני המקרים, את החומרים המנוהלים צריכים להיות של pH הפיזיולוגי ולא מעצבן. לא צריך להתבצע intradermal או תת עורית זריקות בעורף, שכן מדוברים באתר בשימוש נפוץ לריסון המכרסם.
עירוי לוריד וintraperitoneal נחשבים לעתים קרובות מקביל במכרסמים. נתיבים תוך ורידים של מינון לספק יותר rספיגת apid של תרכובות, עם זאת, בעוד שממשל intraperitoneal צריך להיחשב שווה בערך לנטילה דרך פה 8. יש להקפיד עם intraperitoneally תרכובות מנוהל כפי שהם עלולים לגרום לכאב אם נאגרו לא תקין. המסלול המשותף של ממשל בולוס תוך ורידים במכרסמים הוא דרך ורידי הזנב. אם עירוי לוריד כרוני של חומר הוא רצוי, השתלה של ורידים או עורקי cannulae צריכה להיחשב. חומרי הזרקה לוריד צריכים להיות מועברים נקי מחיידקים, וצריך להיות מוצגים כדי להיות בטוח כדי לנהל דרך וריד. לדוגמה, חומרים שעלולות לגרום המוליזה, פקק או דלקת כלי דם אינם מתאימים לעירוי לוריד.
מסלול gavage intragastric או בעל פה משמש לעתים קרובות לחקות מסלול מינון נפוץ בבני אדם. זה גם מאפשר מינון מדויק של חומרים בהשוואה לנטילה דרך פה באמצעות מזון או מים. זמינות ביולוגית של תרכובותמנוהל באמצעות gavage ישתנה בהתאם למדינה הנמאסת / צום של בעלי החיים, כמו גם מומס או הרכב של המתחם או הביולוגי. מחטי Gavage או האכלה צריכות להיות בגודל המתאים לבעלי החיים בשימוש, ויש לנקות בין חיות, אם מחטים חד פעמיות gavage אינן מעשיות. פציעות שנגרמו על ידי gavage אינן נדירות וכוללות תצהיר של החומר לתוך הריאות או הקרע בקיבה או הוושט. אימון צריך להיות מפוקח על ידי צד מנוסה והתחייב על בעלי חיים מורדמים ראשונה, ואז חיות מורדמות (שיהיה מורדם) לפני gavage בעודם ערים הוא ניסה. ניסיונות gavage ראשונים על חיות ערות צריכים לערב חיות בגודל ממוצע ונפחים קטנים של חומר, כגון מי מלח, שלא יגרמו לפגיעה אם ההליך משתבש. בעלי חיים יש להעריך באופן הדוק לסימני מצוקה, כגון מתנשף, פונים, דימום כחול, או ריור העודף, לאחר gavage ולהרדים במקרה צורך. אם euthanasia נדרש, בעלי החיים צריכים שלאחר מוות כדי לקבוע מדוע הליך gavage נכשל.
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
המחקר הנוכחי נתמך על ידי צ'ארלס ריבר.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
| Needles | Various | Various | Needles are sold by both gauge and length. Check both before ordering. |
| Syringes | Various | Various | Always choose an appropriate size for the volume to be administered. |
| DecapiCones | Braintree Scientific | DC-200, DCL-120, MDC-200 | Available in mouse and rat sizes. |
| Rodent restrainer | Harvard Apparatus, Braintree Scientific, Plas-Labs, others | Available in clear Plexiglas, adjustable plastic, and sized for mice and rats. | |
| 50 ml conical tube | Various | ||
| Feeding needles | VWR, Popper and Sons | Various | Fit the needle gauge and length to the animals as described above. Both disposable and reusable feeding needles are available. |
References
- Turner, P. V., Brabb, T., Pekow, C., Vasbinder, M. A. Administration of substances to laboratory animals: routes of administration and factors to consider. JAALAS. 50, 600-613 (2011).
- Diehl, K. H. A good practice guide to the administration of substances and removal of blood, including routes and volumes. J. Appl. Toxicol. 21, 15-23 (2001).
- Hurst, J. L., West, R. S. Taming anxiety in laboratory mice. Nat. Methods. 7, 825-826 (2010).
- Maurer, B. M., Döring, D., Scheipl, F., Küchenhoff, H., Erhard, M. H. Effects of a gentling programme on the behaviour of laboratory rats towards humans. Appl. Anim. Behav. Sci. 111, 329-341 (2008).
- Cloutier, S., Newberry, R. C. Use of a conditioning technique to reduce stress associated with repeated intra-peritoneal injections in laboratory rats. Appl. Anim. Behav. Sci. 112, 158-173 (2008).
- Romanovsky, A. A., Kulchitsky, V. A., Simons, C. T., Sugimoto, N. Methodology of fever research: why are polyphasic fevers often thought to be biphasic. Am. J. Physiol. 275, 332-338 (1998).
- Turner, P. V., Pekow, C., Vasbinder, M. A., Brabb, T. Administration of substances to laboratory animals: equipment considerations, vehicle selection, and solute preparation. JAALAS. 50, 614-627 (2011).
- Lukas, G., Brindle, S. D., Greengard, P. The route of absorption of intraperitoneally administered compounds. J. Pharmacol. Exp. Ther. 178, 562-564 (1971).
- AALAS. . Laboratory Mouse Handbook. , (2009).
- AALAS. . LAT Training Manual. , (2009).
- AALAS. . LATg Training Manual. , (2009).
- Barnett, S. W. . Manual of Animal Technology. , 440 (2007).
- Baumans, V., Pekow, C. A., Hau, J., Schapiro, S. J. . Handbook of Laboratory Animal Science. 1, 401-446 (2010).
- Bogdanske, J. J., Hubbard-Van Stelle, S., Riley, M. R., Schiffman, B. M. . Laboratory Mouse Procedural Techniques. , (2011).
- Danneman, P., Suckow, M. A., Brayton, C. . The Laboratory Mouse. , (2000).
- Sharp, P. E., La Regina, M. C. . The Laboratory Rat. , (1998).
