マウスとラットの拘束マニュアルと共通の複合投与経路

1。安全な拘束と動物のジェントル取扱い実験手順の重要な部分であるこの動画は、あなたの機関が提供するハンズオントレーニングを補足するように設計されています。 常にすべての実験手順を開始する前に、動物実験委員会や倫理委員会の承認が所定の位置にあることを確認してください。 プロトコルに取り組んでそれぞれの人がそのプロトコルのために承認された手順の詳細は、彼らが作業している他のものを知っている必要があります。 自信を持って齧歯類に近づき、優しく動物を扱うが、しっかりと。あまりにも乱暴な取り扱い及び仮両方のアプローチは、ハンドラや動物への傷害に刺されや傷の原因になります。 動物を取り扱う際は、偶発的な放出または削除されている動物の可能性は常にあります。これらの操作のほとんどは、最高の動物を落としたり、エスケープされている場合は、それが怪我をされておらず、簡単に奪還することができるように、作業面上で実行されます。あなたのinstiに従ってください床に連絡動物に関するtutionalポリシー。 これは尾の脱手袋損傷の原因になることがあり、尾の先端で動物を扱うことはありません。大ラットや妊娠中のマウスには特に注意してください。いつもあなたが尾で持ち上げるように身体をサポートするために、もう一方の手を使用しています。 鋭い針は、注射を与える場合に最もうまく作動します。実験用げっ歯類用の針が時々複数回の注射のために使用されているが、これはいくつかの理由で、小さなゲージが頻繁に針が鈍いその迅速な手段を使用していたとなっている以上には推奨されません。 噛まれたり傷があることは常に動物での作業の可能性である。物質またはヒトへの傷害を引き起こす可能性があり感染性病原体を扱う場合は、ヒュームフードまたはバイオセーフティキャビネット内の余分な注意事項、そのような操作動物や薬剤を取る。 手順を実行する前に、取り扱いに優しいアプローチと順応が少なく処理によって強調されている動物で完済することができます。 化合物投与、及び実験動物の前に動物を制御する物質を投与する練習を試みる前に、練習に制限することをいう。 これらのテクニックを実践する定期的に自信と信頼の結果より良いハンドリングで、より少ないストレス動物、そしてより良い研究成果を浸透さ。 動物が反抗的である場合、任意の処理技術では、さまざまな手法を試してみてください。動物（とハンドラ）もケージに戻って動物を入れて、後でもう一度しようとすることから利益を得ることができる。 2。マニュアル拘束片手でマウス拘束尾の付け根でマウスを持ち上げて、ケージのふた、ワイヤーバーケージ上部、または類似した粗面の上に置きます。 片手でマウスの拘束は、通常使用のための無料利き手を残して、非利き手で行われる。 別の方法は、技術者が配置するために前腕を覆うそれらの白衣や制服スリーブを使用することができます拘束前に動物。 そっと尾に戻って引っ張りながら、3回目と4 回目の指の間に尾の付け根を挟む。これは、すべての4つの足で表面をつかんで前方に引っ張るには、マウスの原因となります。 彼らの尾によって彼らの全体の体重を一時停止する場合は特に、尾の先端によってマウスをつかまないでください。これは、尾の皮膚がオフにスリップしている脱手袋損傷を引き起こす可能性があります。 次に、しっかりとテールを保持しているのと同じ手で首筋てマウスを握ります。頭の付け根付近人差し指と親指でつかんで、真ん中と薬指を組み込むことにより、マウスの背中の下に理解を広げる。 回転または拘束の外ねじれからマウスを防ぐために首の周りの皮膚に、ちょうど十分な圧力、または堅さを適用するが、そのようにしっかりと動物が呼吸することができない皮膚を引っ張らないように注意してください。 ヘッドの制御は非常に重要です。場合マウスはその頭を動かすことができる、それがハンドラの指に到達することができますし、噛むかもしれません。初心者ハンドラは遠すぎる背中マウスダウンではなく、頭蓋骨の後ろの権利を把握するとき、これは起こるかもしれません。 マウス拘束両手ケージのふた、ワイヤーバー蓋、または粗面上の尾と場所のベースでマウスを持ち上げます。 別の方法は、技術者が事前抑制に動物を配置するために前腕をカバーする彼らの白衣や制服スリーブを使用することができます。 尾を軽く後方に引いて、マウスが4足で表面をつかんで前方に引っ張ってくる。 次に、もう一方の手で素早くしっかりと（片手拘束上記参照）首筋てマウスを握ります。 片手で尾およびその他の首筋で、マウスを持ち上げて、手のひらと首筋を持っている手の3 番目または4 番目の指の間に尾の付け根を挟む。 片手メソッドと同様に、しっかりとねじるかそこらしっかりと動物が呼吸することができない把握していない間ONにしてからマウスを防ぐために襟首をつかむ。 マウスがscruffingに耐性がある場合は、マウスの背中に優しい圧力は手が良く把握のために上下に移動できるようにすることができます。 ラット拘束; scruffing ラットscruffingは、一般的に両手とだけ小さいラットで行われます。ラットはマウスよりも少ないscruffingを受け入れているので、それは一般的に使用されるテクニックではありませんが、それはいくつかの採血のような場合に便利です。 非利き手で尾によってラットをつかみ、粗面に後方に静かに引き出します（マウスについて上述したように）。 先端付近に把握した場合、ラットの尾皮膚がオフに来ることができるように、尾の付け根付近に把握するように注意してください。 手にしっかりと尻尾をつかみ、後ろからラットの首筋に近づく。 examp用leは、ラットの尾は、ハンドラ '左手にある場合、右手で首筋それに鼻からラットに近づかない。その代わりに、左手の上に到達し、背後から首筋に近づく。 ラットの背部に穏やかな圧力を適用し、肩甲骨の上に、その後の指と手のひらの間に頭蓋底に近い襟首をつかむ。 ヘッドの制御は、刺されを防ぐために重要である。ラット刺され重傷を負うことがあります。 この方法で拘束時のラットは、発声することができる。 ラット拘束、肩のグリップ以上利き手と尾でラットをつかみ、粗面の後方そっと引っ張る（マウスについて上述したように）。 別の方法は、技術者が事前抑制に動物を配置するために前腕をカバーする彼らの白衣や制服スリーブを使用することができます。 ラットの尾皮膚CAとして、尾の付け根付近に把握するように注意してください先端付近に把握している場合、nはオフに来る。 後方から接近、ラットの背中の上に利き手でない手を置きます。 薬指、小指、親指と胸郭の周りにネズミをつかみます。ラットの頭は人差し指と中指の間でなければなりません。 胸部を圧迫しないでください。 本体はハンドラに対して安定化された場合のラットは、片方の手で、このように保持することができる。 ラット拘束、肩グリップ下利き手と尾でラットをつかみ、粗面の後方そっと引っ張る（マウスについて上述したように）。 別の方法は、技術者が事前抑制に動物を配置するために前腕をカバーする彼らの白衣や制服スリーブを使用することができます。 先端付近に把握した場合、ラットの尾皮膚がオフに来ることができるように、尾の付け根付近に把握するように注意してください。 Rの上に利き手でない手を置くの背中では、後方から接近。 右の肩甲骨の下、胸郭の周りラットをつかみます。ラットの前腕を優しく親指と人差し指で押し上げなければならない。 前腕はかむから、それを防止する、ラットの顎の下に交差する必要があります。 胸部を圧迫しないでください。 本体はハンドラに対して安定化された場合のラットは、片方の手で、このように保持することができる。 Decapicone Decapiconeは、一方の端に穴の開いた薄いプラスチックの柔軟な、円錐形の作品です。穴は、マウスやラットは穴ではなく、身体の他の部分とはその鼻を得ることができるので、十分に小さい。 動物を抑制するために、適切なサイズのDecapiconeでマウスまたはラットを置く。 その鼻はDecapiconeの穴から突出するまで前方に動物を押し込みます。 どちら尾の周囲で閉じバッグを持って、またはコーンに動物を密封するためにビニタイを使用しています。 アドバンタDecapiconeのGEは、薄いプラスチック材料を通って注射を可能にすることである。 欠点は材料が呼吸しないと動物が過熱になることができるということです。のみ限り、それは手順を実行するのにかかるようにするためDecapicone動物を保つ。 アクリル/硬質プラスチック制止プラスチック製の拘束装置は、動物の尾がアクセスしなければならない場合に特に有用である。 これらは市販品を購入するか、実験室で行うことができます。 サイズが抑制される動物に対して適切でなければなりません – 動物は、拘束に振り向くことができないべきです。 第一優しく装置の開口部には、頭から、それを解放してから、動物を抑制することにより拘束装置に動物を置きます。 それは、げっ歯類は、しばしば管のように、安全な構造の中にごちゃ混ぜにするように、ケージの上に上向きにデバイスを目指すのに役立つことがあります。 の端に閉鎖を置くこのデバイスは、動物の尾、足、睾丸を傷つけないように注意してください。 動物が過熱することがありますので、restrainersに費やされる時間を最小限に抑えることができます。 動物はそのような小さなタオルで包むことによって、または単に動物の上に手をカッピングなどによって、同様に他の方法で抑制することができる。技術は動物と労働者のニーズを満たすように調整することができます。いつも刺されや傷を避けるために、高さから偶発的な放出や転倒から動物を保護するために世話をする。 3。化合物投与方法これは完全なリストを意味し、他のルートが可能でないことです。このプロトコルは、最も一般的に使用されるルートを説明するために努めています。他のルートは、動物の麻酔と投与後の痛みの緩和を必要とするかもしれません。 かかわらず、投与方法の使用は、すべての材料が動物を拘束する前に準備されていることを確認。 水性材料は、石油ベースとして厚い材料、より注入することが容易であるD化合物。いつも注射器から針が外れ回避するために、非常にゆっくりと厚い化合物を注入します。 一般的な注射針と注射器の使用上の考慮事項。 必ず保管し、適切に注射器と注射針を処分する。 あなたは練習が注射器の取り扱いと動物を注入しようとする前に注入し、注射器と注射針を使用することに慣れていない場合。理想的には、自信を持って動物の拘束のために他を残して、片手でシリンジと針を操作することができます。着実に手は、組織の損傷を最小限に抑え、針の動きを最小限に抑えることができます。 針がポイント、ベベル、シャフト、ハブを持っています。シリンジは先端、バレル、プランジャ（ 図1およびb）を持っています。 針はゲージと長さによって大きさになっている。大きなゲージ番号は、小さい針。小さ ​​な針は曇りに非常になりやすいです（チップ上に形成バリから）とピアスマルチドーズバイアル（ 図1 c）に使用すべきではありません。いつも選ぶ化合物を投与していきます最短針。 針は、ハブによって注射器の先端に取り付けられている。いくつかの注射器はヒントをロックしました。いつも注射器がしっかりと針に取り付けられていることを確認してください。 針は最高の特に静脈内注射のため、アップベベルと動物に挿入されます。 手で針をリキャップすることはありません。これは、針刺し損傷の一般的な原因です。ラベルされた鋭利な容器に適切に注射針や注射器を廃棄してください。針はrecappedなければならない場合、デバイスは（ 図1 d）に用意されています。 鼻腔内（IN） 上記のように動物を拘束。 シリンジやピペットを用いて、動物の鼻孔で吸入されるべき材料の少量を置きます。 鼻孔に消える素材を監視します。 目的のボリュームが投与されたまで、必要に応じて繰り返します。 筋肉内（IM） 目を抑制上記のようにeは動物。動物の後肢の一つは、注射用、無料で安定していることを確認します。拘束は2人を取ることができる。動物は注入時に蹴ることができる場合には、針から筋肉の損傷が発生します。 針は、動物の皮膚に垂直に挿入する必要があります。適切なサイズのシリンジと針を用いて、約ベベルの深針を挿入して、動物の大腿四頭筋（太ももの前面）または横太ももの筋肉量に物質を注入する。 それが坐骨神経を損傷することが可能であるとして、後部筋肉量に注入しないでください。 動物は複数のIM注射、代替の足を受信する場合。 腹腔内（IP） 上記のように動物を拘束。 注入のための腹部を露出して、床に向かって動物の鼻をヒント。 動物の正中線を見つけて、精神的に象限（ 図2）に腹部を分ける。下段象限、特に動物の右下の象限は、腹腔内注射に適したサイトです。 右下の象限は、解剖学的に重要な構造の欠如のために選択されます。 適切なサイズのシリンジと針を用いて、動物に物質を注入。 動物が繰り返されるIP注射を受信する場合は、注射部位を交互に。 皮下（SC、SQ） 上記のように動物を拘束。動物は皮膚が動員されることができるように緩く十分に抑制されなければならない。 動物はSC注射後に日常的に処理される場合、首筋（うなじ）は使用しないでください。その代わりに、背臀部や脇腹の皮膚を使用しています。動物は複数のSC注射、注射の代替サイトを受信する場合。 肌を持ち、ゆっくりと上方に引き、 "テント"を作る。 射出ソロを行っている場合は、針を差し込んで、静かトン耳鼻咽喉科皮膚針が皮下空間になっていることを確認するために針を上方に。 適切なサイズのシリンジと針を使用して、テントを張った皮膚に30から45°の角度で針を挿入して、材料を注入します。に平行に注入し、肌を上向きに保持指から。 注入が成功した場合は、皮膚の下に小さな腫れが見られます。 注射後、材料の逆流を防ぐために穏やかな圧力を適用します。 皮内（ID） 皮内注射は、動物は、しばしば皮膚が見られるかもしれないように剃毛されています。 複数皮内注射のための動物の拘束は難しいかもしれません。その場合には、化学的鎮静が必要な場合があります。 IDの注射のためのサイトでは、SCのものと同じです。 15から30°の角度で肌に適切なサイズの針を挿入します。針は非常に遠くに挿入されず、注射は、再と会うべきsistance。 代替的アプローチは優しく注射部位に隣接する皮膚をつまむと非常に浅い角度で針を挿入することです。それは注入プロセスの間に移動することを防ぎますので、これはマウスで便利です。 注入が成功した場合は、小さな水疱が見られます。それは周囲の皮膚よりも白っぽいとなります。 注射後、材料の逆流を防ぐために穏やかな圧力を適用します。 血管内（IV） 左右外側尾静脈がマウスとラットで使用される最も一般的な血管アクセス経路である。 他の血管アクセス経路はマウスとラットで可能であるが、一般的に鎮静やポスト噴射痛みの緩和を必要とする。 尾静脈注射については、Decapiconeまたはプラスチック製のげっ歯類の拘束で動物を拘束。 ランプの下で、または保護された加温装置で動物の尾を置きます。これは簡単に注入が可能になり、血管拡張を推進していきます。動物を過熱しないでください。 大型雄ラットは、尾から皮膚のスケールを洗浄する静脈のより良い視覚化を可能にすることができる。皮膚が削れないようにクリーニングが穏やかでなければなりません。 非利き手で先端によって動物の尾を持ってください。これは、尾をまっすぐにします。 尾を回転¼やすく注射用背尾静脈を配置してください。動物には、2つの外側尾静脈および腹側尾動脈（ 図3）があります。 15から20度の角度で針で尾に近づく。尾の先端部分から始まります。 静脈が浅く、針がはるかにベベルを超え挿入されるべきではない。 注射が遠位にできるだけとして開始される場合、注射をしようとするより多くの損傷を受けていない静脈は、最初は失敗してみてください、そこにある。 材料を注入します。成功した注射はなしで静脈に入る材料になります抵抗と注入の持続時間のために尾静脈から湯通し。 これは静脈を崩壊するような、注入する前に吸引しないでください。 注入後の静脈穿刺部位に穏やかな圧力は、出血を防ぐことができます。 失敗注射では、材料は、容易に流れることはありません。その代わりに、尾の皮膚が白くなる、または材料がすべてで注入することができません。 胃内投与（経口強制飼養） だけ抑制された、目を覚まし動物に強制経口投与を行ってください。麻酔や鎮静は、誤嚥の危険性（材料が誤って肺に入る）を増加させる。 使用するために適切なサイズの経口摂取針を選択します。これらの針は、気管に彼らの通過を防ぐために、最後にボールのヒントを持っています。 必要な長さは控えめな動物を持ち上げ、口の隅から測定することにより求めることができる。給餌針のボールチップは、動物の最後の肋骨（<に達する必要があります強い>図4）。ニードルゲージは動物の体重によって決定されます。 その頭と体がまっすぐな、垂直線になるように、動物を拘束する。これは給餌針の通過のために簡単にできるように、食道をまっすぐ。 舌の上、動物の口の中に針のボールチップを挿入します。針が適所にいったんあると、口蓋に軽く押し、針と注射器を立ち上げ、動物の鼻が天井に向かっているので。 ラットでは、針は、それが喉の奥を通過するときにわずかにリダイレクトする必要があるかもしれません。針上の任意のテンションが位置を調整する必要があることを示し所定の距離に到達するまで、針を通過し続けています。針が簡単に渡す必要があり、動物が息をのむか、チョークではありません。 物質を投与。これは、胃の中に流れる必要があります。抵抗または動物あえぎ、チョーク、または青に変わりがある場合は、直ちに停止し、必要性を取り除くル。吸引された動物は、投与された化合物に応じて、安楽死を必要とするかもしれません。 4。代表的な結果動物は正しく処理されている場合、動物とハンドラの両方のためにストレスの最小値が存在する。ハンドラは、噛まれたり傷、動物を人道的にかつ有能に処理され得ることはありません。化合物が組織に与えるダメージを最小限にし、できるだけ動物に少し不快感などの正しい経路を介して投与されています。 調査官は小さな動物のぬいぐるみと協力して、動物を取り扱うに慣れていない場合は役に立つかもしれません。このような高研ラットのようないくつかのテクニックのために利用可能な動物シミュレーターもあります。多くの研究者のために、動物を取り扱う前に、注射針や注射器に慣れるために少しチャンスがある。注射針と注射器の代表的な部品は、 図1Aおよび図1Bに示されている。初めて動物を注入する前に、それ動物を扱う前に注入を実施するのに役立つことがあります。そのような28と30グラムのような非常に微細な針は、損傷しやすい。マルチユースバイアルから物質を引き出す場合は、注射用の小さなゲージの針と交換し、その目的のために太い針を使用し、。目の粗い針を図1Cに見られている。そのような手で使用済みの針を要約していないように針を操作する際の基本的な安全上の注意を払う必要があります。 図1Dは、使用中の針recapperを示しています。これに針を削除する必要がある研究者に貴重なことができ、例えば、血液が針を通して押されたときに見られる溶血せずに注射器から血を表現しています。 図2と図3は、注入のための目標を示す、腹腔内注射し、尾の典型的な構造のためにランドマークを示しています。 図4は強制飼養針の適切なサイジングの例を示します。強制経口投与針はの口から到達する必要があり最後の肋骨下右側にnimal。 図1。）ニードルおよびB）注射器の部品は、標識された。 C）のマルチユースバイアルへの針の繰り返し配置することによって引き起こされる針にバリ。 D）が使用されているニードルrecapper。 図2腹部腹側の象限。のみ優先的に低い2つの象限、右下腹部に注入。 図3断面のテールの回路図、骨とtendenous構造への動脈と静脈の関係を示す。 図4ラットでサイジング強制経口針。 A）の強制経口針あまりにLONグラム。 B）は、適切なサイズの強制飼養針。あまりに短いC）強制経口針測定、D）を強制経口投与し、適切な針のサイズを決定するために、最後の肋骨のために触診する。 マウス ラット ルート 推奨されるボリューム 針の推奨ゲージと長さ 推奨されるボリューム 針の推奨ゲージと長さ 鼻腔内の1 μlの5月25日 N / A μlの5月25日 N / A 筋肉内1,2 0.00005ミリリットル/グラム <23グラムで0.5から0.75 0.1ミリリットル/キログラム <21グラムで0.5から0.75 腹腔1,2 0.02ミリリットル/グラム <21グラム、0.75から1で 10ミリリットル/キログラム <21グラム、0.75から1で皮下1,2 0.01ミリリットル/グラム <22グラムで0.5から1 5ミリリットル/キログラム <22グラムで0.5から1 皮1 0.05〜0.1ミリリットルで<26グラム、0.5 0.05〜0.1ミリリットルで<26グラム、0.5 静脈1,2 0.005ミリリットル/グラム-0.025 ml / gで* <25グラムで0.75から1 5 ml/kg-20ミリリットル/キログラム* <23グラムで0.75から1 経口強制1,2 0.01ミリリットル/グラム 20〜22グラム送り針 5〜10ミリリットル/キログラム 16〜20グラム送り針 *最初の数字は、約1分間にわたって静脈内ボーラスとして与えられたボリュームです。第二巻は5〜10分以上遅い注入として与えられてもよいボリュームです。 <sチョン·>表1の推奨用量とマウスおよびラットにおける化合物の種々の投与経路のための針のサイズ。