Electrolítico de la vena cava inferior del modelo (EIM) de la Trombosis Venosa

1. Procedimientos de ratón anestesia Los animales son extraídas de su jaula y se colocan en una cámara de inducción de la anestesia antes de la operación para la inducción de gas en el 2% de isoflurano y oxígeno al 100%, con un caudal de 0,5 litros por minuto (vaporizador controlada). Los ratones son sedados en la cámara de inducción de la anestesia, se retiran de la cámara y la parte ventral del abdomen se afeita con una maquinilla eléctrica, o mantenerse dentro de la cámara si es una crema depilatoria el cabello se utiliza (1 min). Si bien todavía bajo sedación, se pesan, los ojos están lubricados con ungüento oftálmico estéril y, a continuación, coloca en recumbancy dorsal en un dispositivo de calentamiento de agua caliente que circula bajo anestesia general con un cono de la nariz con isoflurano y oxígeno. En este punto, la tasa de oxígeno se reduce a 0,2 litros por minuto. El abdomen se rocía con una solución de clorhexidina (diacetato de clorhexidina es rápidamente bacterialcidal y persistente) y se limpió con una gasa estéril tres veces o hasta que el sitio quirúrgico está limpio. 2. Ratón Micro-quirúrgicos y procedimientos de recuperación Una incisión de línea media ventral (2 cm) se realiza con unas tijeras iris a través de la piel y la pared abdominal exponer el abdomen. Una solución salina estéril 2×2 empapado en una gasa se utiliza para reflejar los intestinos al lado izquierdo del animal. Una inmovilización del ratón se pone en la visualización lugar en que se de la vena cava inferior (VCI). En este punto, el isoflurano se reduce a un nivel de mantenimiento del 2% y la tasa de oxígeno se mantiene en 0,2 litros por minuto para el resto de la intervención quirúrgica. Disección roma se facilita con un hisopo aplicador estéril y extra pinzas delicadas medio del iris curva de tejidos. Se debe tener cuidado en la manipulación de los tejidos del ratón para que son extremadamente frágiles. Todas las ramas laterales IVC, a partir de las venas renales hasta la bifurcación ilíaca, se ligan con sutura de prolene 7-0 no reactivo. Ramas de nuevo quedó patente. En el modelo electrolítico IVC (EIM), un 25G aguja de acero inoxidable, unido a un cable de cobre recubierto de plata (KY-30-1-GRN, Electrospec, Dover, Nueva Jersey) se inserta en la vena cava inferior expuestos caudal, (Figura 1) y se coloca contra la pared anterior (ánodo). Otro cable se implanta subcutáneamente completando el circuito (cátodo). Una corriente de 250 μAmps más de 15 minutos se aplicó mediante un estimulador Grass S48 onda cuadrada y una unidad de corriente constante (Tecnologías de la hierba, un Astro-Med, Inc., West Warwick, RI). Los resultados directos actuales en la formación de productos tóxicos de la electrólisis que erosionan la superficie endotelial de la vena cava inferior la promoción de un ambiente trombogénico y posterior formación de trombos. Después de 15 minutos, se retira la aguja y un hisopo de algodón se realiza con suavidad en contacto con el área para prevenir el sangrado En los animales sham, se coloca la aguja en la vena cava inferior y luego se retira, sin la aplicación de la corriente. El sitio de la laparotomía se cierra en forma de dos capas. Nuestro laboratorio utiliza Vicryl 5-0, una sutura sintética, en un patrón continuo para cerrar la pared abdominal. Pegamento pegamento de la piel se utiliza para cerrar la piel. No hay puntos de sutura externos para su eliminación. Ratones después se recuperan en una jaula de ratones individuales, observado de cerca después de la operación (45 minutos a 2 horas), bajo una lámpara de calentamiento (distancia min 24 pulgadas de distancia de la jaula), y luego regresaron a sus viviendas originales. Medicamentos para el dolor y agentes anti-inflamatorios no se puede utilizar si no interfiere con el objetivo de este estudio. Justificación científica para suspender medicamentos para el dolor, veterinarios, y la aprobación ICUCA se necesitan. Nuestro laboratorio ha descubierto que la buprenorfina ,0.05-0 0,1 mg / kg vía subcutánea es un analgésico excelente pre-y post-operatorios para los ratones. Además, la lidocaína en 4mg/kg (0,4 ml / kg de una solución al 1%) puede ser infundida en el sitio de la incisión, cuando analgésicos sistémicos pueden confundir los resultados experimentales. Por lo general no la experiencia post-operatorio efectos adversos debido a la trombosis venosa profunda. Sin embargo, los efectos adversos post-operatorio efectos pueden incluir la muerte espontánea de anestesia, la pérdida quirúrgica de sangre, y la parálisis parcial debido a un traumatismo del nervio. Los animales que son de lenta recuperación se puede alimentar la nutria o gel húmedo comida colocados en el suelo de la jaula para facilitar la recuperación del animal. Los animales con cortar las complicaciones postoperatorias deberían ser sacrificados evitando la eutanasia. En el punto en el tiempo asignado, la eutanasia se lleva a cabo humanamente de acuerdo con las recomendaciones establecidas por la American Veterinary Medical Association Directrices sobre la eutanasia para los roedores. 3. Resultados representante La EIM es un modelo que se forma un trombo en la presencia de flujo continuo de sangre. Las siguientes figuras muestran los parámetros investigados en este nuevo modelo. Figura 1 definesthe área anatómica en donde un 25G de acero inoxidableaguja, conectada a un cable de cobre recubierto de plata (KY-30-1-GRN, Electrospec, Dover, Nueva Jersey) se inserta. Tenga en cuenta que un nodo linfático es casi presente y ayuda como punto de referencia para encontrar el caudal IVC. Figura 2: El peso del trombo 2 días después de la EIM en las diferentes cepas. Como era de esperar, el peso del trombo fue menor en el PAI-1 ratones KO y mayor en los ratones de hipercoagulabilidad Delta CT (CT ^). Figura 3: P-selectina soluble, un fabricante de trombosis venosa profunda, se midió en diferentes cepas. Los niveles más bajos se encontraron en el PAI-1, mientras que los ratones KO los niveles más altos se encontraron en ratones de hipercoagulabilidad delta CT. Figura 4 Correlación entre el peso del trombo y P-selectina soluble se encuentra en las diferentes cepas. Es de destacar que en el grupo que generó el menor tamaño del trombo, la P-selectina soluble detectada fue la más baja (PAI-1 ratones KO). En el grupo que generó el mayor tamaño del trombo, la P-selectina soluble detectada fue la más alta (hipercoagulabilidad CT delta). Figura 5: Con el fin de demostrar la presencia de flujo de la sangre, la ecografía se realizó en ratones sometidos a la EIM. Figura 5 se muestra la ecografía realizada en un ratón de 2 días después de la EIM. A continuación, la muestra fue la cosecha. Tenga en cuenta que la forma del trombo sugieren la formación de trombos en la presencia de flujo