1. Maus Anästhesieverfahren Die Tiere sind aus ihrem Käfig genommen und in ein Betäubungsmittel präoperativen Induktion Kammer für Gas Induktion mit 2% Isofluran und 100% Sauerstoff mit einer Flussrate von 0,5 Liter pro Minute (Verdampfer gesteuert). Mäuse sind in der Narkoseeinleitung Kammer sediert, entfernt von Kammer-und der ventralen Bauch ist mit elektrischen Haarschneider rasiert, gepflegt oder in der Kammer, wenn ein Haar Enthaarungsmittel verwendet wird (1 min). Noch unter Sedierung, sie wogen, werden die Augen mit einer sterilen Augensalbe und dann in Rückenlage recumbancy an einem warmen Wasser zirkuliert Heizgerät gelegt unter Vollnarkose mit einer Nase Konus mit Isofluran und Sauerstoff geschmiert. An diesem Punkt der Sauerstoffmenge auf 0,2 Liter pro Minute reduziert. Der Bauch ist mit Chlorhexidin-Lösung besprüht (Chlorhexidindiacetat schnell bacterialcidal und persistent) und wischte sich mit steriler Gaze dreimal oder bis zum OP-Gebiet ist sauber. 2. Maus Micro-chirurgischen und Recovery-Verfahren Ein ventralen Mittellinie Schnitt (2 cm) ist mit Iris Schere durch die Haut und Bauchwand Freilegung der Bauch gemacht. Ein steriler Kochsalzlösung getränkt 2×2 in Gaze wird verwendet, um den Darm des Tieres linken Seite widerspiegeln. Eine Maus restrainer ist in Ort ermöglicht die Visualisierung der unteren Hohlvene (IVC) setzen. An diesem Punkt ist die Isofluran zu einer Wartung Niveau von 2% reduziert und der Sauerstoff bleibt bei 0,2 Liter pro Minute für den Rest des chirurgischen Eingriffs. Stumpfe Präparation wird erleichtert, mit einem sterilen Tupfer Applikator und extra zarte Iris halbgebogen Gewebe Zange. Es muss im Umgang mit Maus Gewebe für sie äußerst fragil eingenommen werden. Alle IVC Seitenäste, von der Nierenvenen der iliakalen Bifurkation, werden mit 7-0 nicht-reaktiven Prolene Fäden ligiert. Zurück Niederlassungen blieb Patent. Bei der elektrolytischen IVC-Modell (EIM), eine 25G Edelstahl-Nadel, die an einer versilberten Kupferdraht (KY-30 bis 1-GRN, Electrospec, Dover, NJ) in der exponierten caudal IVC, (Abbildung 1) eingefügt und gegen die vordere Wand (Anode) positioniert. Ein weiterer Draht wird subkutan implantiert Abschluss der Schaltung (Kathode). Ein Strom von 250 μAmps über 15 Minuten wurde mit einem Grass S48 Rechtecksignal Stimulator und ein konstanter Strom-Einheit (Grass Technologies, ein Astro-Med, Inc., West Warwick, RI). Der Gleichstrom führt zur Bildung von toxischen Produkten der Elektrolyse, dass die Endothel-Oberfläche des IVC zur Förderung einer thrombogenen Umwelt und nachfolgende Thrombusbildung erodieren. Nach 15 Minuten wird die Nadel entfernt und ein Wattestäbchen wird sanft in Kontakt mit der Umgebung, um die Blutung zu verhindern statt In sham Tieren ist die Nadel in die IVC gelegt und dann entfernt, ohne Anwendung des Stroms. Die Laparotomie Website wird in einem Zwei-Schicht verschlossen. Unser Labor verwendet 5-0 Vicryl, ein synthetisches Nahtmaterial, in einem kontinuierlichen Muster, um die Bauchdecke zu schließen. Adhesive Hautleim wird verwendet, um die Haut zu schließen. Es gibt keine externen Nähte für die Herausnahme. Mäuse werden dann in einer individuellen Maus Käfig wieder, dicht postoperativ (45 Minuten bis 2 Stunden) unter einer Wärmelampe (min Abstand 24 cm entfernt von Käfig) beobachtet, dann wieder an ihren ursprünglichen Wohneinheiten. Schmerzmittel und entzündungshemmende Mittel können verwendet werden, wenn sie nicht mit Studienziel nicht stören. Wissenschaftliche Begründung für Schmerzmittel vorenthalten, Veterinär-und ICUCA Genehmigung erforderlich sind. Unser Labor hat festgestellt, dass Buprenorphin ,0.05-0 .1 mg / kg SQ ein ausgezeichnetes pre-und post-operative Analgetikum für Mäuse ist. Darüber hinaus kann Lidocain bei 4mg/kg (0,4 ml / kg einer 1% igen Lösung) in die Inzisionsstelle infundiert werden, wenn systemische Analgetika können experimentelle Ergebnisse zu verwechseln. Wir in der Regel nicht erleben postoperativen Beeinträchtigungen durch DVT. Allerdings können negative post-operative Effekte sind spontane Anästhesie Tod, chirurgische Blutverlust und partielle Parese aufgrund Nerventrauma. Tiere, die nur langsam regenerieren können eingespeist Nutria Gel oder feuchten chow auf dem Boden des Käfigs, das Tier die Genesung zu erleichtern platziert. Tiere mit sever postoperative Komplikationen human eingeschläfert werden. Am zugewiesen Zeitpunkt ist die Euthanasie menschlich in Übereinstimmung mit den Empfehlungen der American Veterinary Medical Association Richtlinien zur Euthanasie für Nager gesetzt durchgeführt. 3. Repräsentative Ergebnisse Die EIM ist ein Modell, Thrombus bildet in Gegenwart von kontinuierlichen Blutfluss. Die folgenden Abbildungen zeigen Parameter in diesem Roman Modell untersucht. Abbildung 1 definesthe anatomischen Bereich in dem ein 25G EdelstahlNadel, an einem versilberten Kupferdraht (KY-30 bis 1-GRN, Electrospec, Dover, NJ) eingesetzt wird. Beachten Sie, dass ein Lymphknoten fast vorhanden ist und hilft als ein Wahrzeichen der kaudalen IVC zu finden. Abbildung 2: Thrombus Gewicht von 2 Tagen nach EIM in verschiedene Stämme. Wie erwartet, war Thrombusgewichts niedriger PAI-1 KO-Mäuse und größere in Hyperkoagulabilität Delta CT-Mäuse (^ CT). Abbildung 3: Löslich P-Selektin, einem Hersteller für tiefe Venenthrombose, wurde in verschiedenen Stämmen gemessen. Die niedrigsten Werte wurden in PAI-1 KO Mäusen gefunden, während die höchsten in Hyperkoagulabilität delta CT-Mäusen gefunden wurden. Abbildung 4 Zusammenhang zwischen Thrombus Gewicht und löslichen P-Selektin wurde in verschiedene Stämme gefunden. Zu beachten ist, in die Gruppe, desto kürzer Thrombus Größe erzeugt, wurde das lösliche P-Selektin nachgewiesen dem niedrigsten (PAI-1 KO-Mäuse). In der Gruppe, der größte Thrombus Größe erzeugt, wurde das lösliche P-Selektin erkannt höchsten (Hyperkoagulabilität delta CT). Abbildung 5: Um die Anwesenheit von Blut fließen zu demonstrieren, Ultraschall wurde in Mäusen unterziehen EIM durchgeführt. Abbildung 5 zeigt die Ultraschall in einem Maus-2 Tage nach EIM durchgeführt. Dann wurde die Probe zu ernten. Beachten Sie die, dass der Thrombus Form Thrombusbildung schlage in Anwesenheit von Flow