NanoDrop микрообъеме Количественное определение нуклеиновых кислот
Summary
Использование системы NanoDrop микрообъеме практические и эффективные альтернативы традиционной методологии количественного нуклеиновых кислот описывается через демонстрацию двух микрообъеме нуклеиновых протоколами количественного кислоты.
Abstract
Биомолекулярных анализов постоянно развивается постепенно, использующих меньшее количество материала, часто исключающих применение обычных кювет основе инструментов для нуклеиновых кислот количественного для тех, которые могут выполнять микрообъеме количественного определения.
NanoDrop образец микрообъеме удерживающая система (Thermo Продукты Научно NanoDrop) функции путем объединения волоконно-оптических технологий и природных свойств поверхностного натяжения, чтобы захватить и удерживать незначительное количество образца независимо от традиционного аппарата сдерживания таких как кювет или капилляров. Кроме того, система использует более короткий путь длины, что приводит к широкому спектру нуклеиновых измерения концентрации кислоты, по существу, избавляя пользователя от необходимости выполнять разведения. Сокращение объема образцов, необходимых для спектрального анализа также облегчает включение дополнительных мер контроля качества на протяжении многих молекулярные процессы, повышая эффективность и в конечном итоге приводит к большей уверенности в нижнем течении результаты.
Необходимость высокой чувствительности флуоресцентного анализа ограниченной массы также появились с недавних экспериментальных достижений. Используя ту же технологию удержания образца микрообъеме, флуоресцентные измерения могут быть выполнены с 2 мкл материала, что позволяет флуоресцентные объем анализов требования, которые должны значительно сокращен. Такие microreactions от 10 мкл или менее теперь возможно с помощью выделенного fluorospectrometer микрообъеме.
Два микрообъеме нуклеиновые кислоты протоколами количественного будет показано, что использование интегрированных пример сохранения системы как практические альтернативы традиционным кювет основе протоколов. Во-первых, прямой A260 поглощения методом с использованием спектрофотометра микрообъеме описано. Это сопровождается демонстрацией флуоресценции основе метода, который позволяет снизить объемы флуоресценции реакции с fluorospectrometer микрообъеме. Эти новые методы позволяют оценивать нуклеиновых кислот концентрацией от 1 пг / мкл до 15000 нг / мкл с минимальным потреблением образца.
Protocol
Discussion
Количественного протоколы, представленные здесь, основаны на наиболее широко признанных микрообъеме систем. Такие системы обеспечивают практические альтернативы для традиционных нуклеиновых методологии количественного кислоты, которые полагаются на большее объемы проб и использование сдерживания аппарата.
NanoDrop микрообъеме технология работает система удержания образца, который полагается на поверхностное натяжение свойства образца измеряется в форме столба жидкости. Очень важно, чтобы образец вступает в контакт с верхней и нижней поверхностях оптических измерений для правильного формирования колонки. Если в любой момент результаты измерений, кажется неточным или не воспроизводимы, то, скорее всего результат неоднородности образца или жидкости поломки колонки.
Моющие средства и изопропиловый спирт, не рекомендуется чистящие средства, поскольку они могут uncondition поверхности пьедестала измерения. Безусловных пьедестал происходит, когда гидрофобные свойства поверхности пьедестала были скомпрометированы, в результате чего уплощение образца капли. Безусловное пьедесталы может привести к поломке столба жидкости во время измерения.
Рисунок 3. Безусловное поверхность характеризуется уплощением капли воды.
Uncondtioned поверхности пьедестал может быть восстановленные использованием NanoDrop Пьедестал Восстановление соединений (ПР-1, Thermo Scientific NanoDrop продукты). Тонкий слой восстановление соединения применяется к верхней и нижней поверхностях пьедестала, дают высохнуть в течение ~ 30 секунд, затем стирается с помощью чистой, сухой, без ворса протрите лаборатории. Успешно восстановленное состояние характеризуется капли воды бисером, когда наносится на поверхность пьедестала вниз.
Рисунок 4. Восстановленное поверхность характеризуется бисером из капли воды.
Системы микрообъеме количественного значительно сократить потребление и образец значительно увеличить диапазон концентраций по сравнению с более традиционными системами количественной оценки. Хотя микрообъеме количественного нередко становится технологией для обстоятельств, связанных с ограниченным клеточной массы, таких как иглы биопсии и лазерно-захвата микродиссекции, эффективность и простоту в использовании данной методики дало широкое признание альтернативой традиционным методам количественного нуклеиновые кислоты даже когда образец имеется в изобилии.
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Ричард У. Берингер и Дэвид Л. Эш, Приложения Ученые, Термо продукты Научно NanoDrop, для оказания технической помощи и съемок.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| NanoDrop 2000c | Thermo Fisher Scientific | ND-2000C | ||
| NanoDrop 3300 | Thermo Fisher Scientific | ND-3300 |
References
- Wilfinger, W. W., Mackey, K., Chomczynski, P. Effect of pH and Ionic Strength on the Spectrophotometric Assessment of Nucleic Acid Purity. BioTechniques. 22, 474-481 (1997).
- Voolstra, C., Jungnickel, A., Borrmann, L., Kirchner, R., Huber, A. Spectrophotometric Quantification of Nucleic Acids: LabelGuard enables photometric quantification of submicroliter samples using a standard photometer. Implen Applications Note. , (2006).
- Jr, I. n. g. l. e., D, J., Crouch, S. R. . Spectrochemical analysis. , XV-590 (1988).
- Van Lancker, M., Gheyssens, L. C. A comparison of four frequently used assays for quantitative determination of DNA. Anal. Lett. 19, 615-623 (1986).
