Yetişkin Hipokampal Arctic Zemin Sincap Nöral Kök Hücre Büyüme ve Farklılaşma
Summary
Sinir kök hücreleri, yetişkin olmayan kış uykusuna toklu Arctic zemin sincap (AGS) hipokampus hazırlanmıştır. Bu sinir kök hücreleri, sayısız kanallar sayesinde genişletilmiş, farklılaşmış ve glial kültürü neredeyse 50:50 nöron olarak muhafaza edilebilir.
Abstract
Arctic zemin sincap (Urocitellus parryii, AGS) dondurulması 1 yakınında ya da altında bir çekirdek vücut ısısı ile hibernate yeteneği benzersiz. Bu hayvanlar aynı zamanda, in vivo 2,3 ve oksijen-glikoz in vitro 4,5 mahrum beyin iskemik yaralanmalara karşı. Bu benzersiz nitelikleri, yaralanma ve iskeminin neden olduğu hücre ölümü ve son derece soğuk havalarda karşı AGS nöronların kapasitesi hesabı doğasında nöronal özellikleri incelemek AGS nöronlar izole etmek için bir ivme sağladı. Proteinler ya da bu hücrelerin ayırt edici özelliklerini sağlayan gen hedefleri belirleme iskemik endikasyon ve soğuk hoşgörü çalışması için bir dizi etkili tedavilerin keşif yardımcı olabilir. Yetişkin AGS hipokampus, bu kök hücrelerin kültür kolay genişleme için izin, yayılmaya devam etmektedir nöral kök hücreler içerir. Biz burada araştırmacılar amaçlarla herhangi bir sayı için, bu kök hücreler ve farklı nöronların yararlanabilirler hangi yöntemleri açıklanmaktadır. AGS bu adımları yakından takip ederek nöral kök hücreler, iki veya daha fazla pasajlar ile genişletilebilir ve sonra bölünen hücreleri sayısını en aza indirmek için toksik kimyasallar kullanmadan TUJ1 pozitif nöronların (~% 50) yüksek bir kültür için farklılaşmış. İskemi nöron 6 ve MEK / ERK ve PI3K/Akt hayatta kalma sinyalizasyon yolları, in vivo 7 ve in vitro 8 (Kelleher-Anderson, Drew ve ark, hazırlanmakta) iskemi direncine katkıda bulunur üzerinden ilerler nöron neden olur. Bu eşsiz sinir hücrelerinin ileri karakterizasyonu, bazı veya tüm bu yöntemleri kullanarak, birçok cephede ilerleme.
Protocol
Discussion
AGS yetişkin sinir kök hücreleri sağlam ve nöral kök hücrelerin çalışması için temel nöral kök hücre özelliklerini mükemmel bir kaynak haline çok sayıda geçişleri için açılabilir. Genişleme oranını yaklaşık iki katına biri her yirmi dört saatte, ancak hücreleri arasındaki temas astrositler farklılaşma lehine olacaktır, çünkü bu hücreler ulaşan izdiham önce geçişli olmalıdır. Bu nedenle, İletişim-aracılı farklılaşma farklılaşma trypsinization ve geçiş öncesinde ba?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Bu çalışma, ABD Ordusu Tıbbi Araştırma ve Materyal Komutanlığı hibe # 05178001 ve Nörolojik Bozukluklar ve İnme Ulusal Enstitüsü NS041069-06 tarafından desteklenmiştir. Biz Joel Vonnahme protokol yararlı yorumlar için teşekkür ederim.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| agsNSC | Lifeline | FC-0004 | ||
| agsNSC Expansion kit | Lifeline | LL-0008 | Alternative source for DMEM/F12, B27 and rhFGFb (www.invitrogen.com) | |
| agsNSC differentiation kit | Lifeline | LL-0009 | Alternative source for DMEM/F12 and ITS-x (www.invitrogen.com) | |
| NeuraLife maintenance media kit | Lifeline | LL-0012 | Alternative sources are NeuraBasal (LifeLine) or Neurobasal (in vitrogen), glutamine and B27 (www.invitrogen.com)Differentiated cells are maintained for up to 3 weeks in NeuroLife, but no more than 2 weeks in Neurobasal (www.invitrogen.com) | |
| Micrometer (such as a Bright Line Counting Chamber) | Hausser Scientific | 1490 | http://www.hausserscientific.com/hausserbrightlinedirect.htm | |
| Biocoat Poly-L-Lysine coated 96 well plates | BDBioscience | 356516 | www.bdbiosciences.com | |
| Large orifice pipette tips | Fisher Scientific | 02-707-141 | Avoids neuronal cell damage when pippetting. http://www.fishersci.com |
References
- Barnes, B. M. Freeze avoidance in a mammal: body temperatures below 0 degree C in an Arctic hibernator. Science. 244, 1593-1595 (1989).
- Dave, K. R., Prado, R., Raval, A. P., Drew, K. L., Perez-Pinzon, M. A. The Arctic ground squirrel brain is resistant to injury from cardiac arrest during euthermia. Stroke. 37, 1261-1265 (2006).
- Dave, K. R. Protein kinase C epsilon activation delays neuronal depolarization during cardiac arrest in the euthermic arctic ground squirrel. J Neurochem. 110, 1170-1179 (2009).
- Ross, A. P., Christian, S. L., Zhao, H. W., Drew, K. L. Persistent tolerance to oxygen and nutrient deprivation and N-methyl-D-aspartate in cultured hippocampal slices from hibernating Arctic ground squirrel. J Cereb Blood Flow Metab. 26, 1148-1156 (2006).
- Christian, S. L. Arctic ground squirrel (Spermophilus parryii) hippocampal neurons tolerate prolonged oxygen-glucose deprivation and maintain baseline ERK1/2 and JNK activation despite drastic ATP loss. J Cereb Blood Flow Metab. 28, 1307-1319 (2008).
- Jin, K. Evidence for stroke-induced neurogenesis in the human brain. Proc Natl Acad Sci U S A. 103, 13198-13202 (2006).
- Maysami, S., Lan, J. Q., Minami, M., Simon, R. P. Proliferating progenitor cells: a required cellular element for induction of ischemic tolerance in the brain. J Cereb Blood Flow Metab. 28, 1104-1113 (2008).
- Sung, S. M. Hypoxia/reoxygenation stimulates proliferation through PKC-dependent activation of ERK and Akt in mouse neural progenitor cells. Neurochem Res. 32, 1932-1939 (2007).
- Brewer, G. J. Isolation and culture of adult rat hippocampal neurons. J Neurosci Methods. 71, 143-155 (1997).
- Palmer, T. D., Takahashi, J., Gage, F. H. The adult rat hippocampus contains primordial neural stem cells. Mol Cell Neurosci. 8, 389-404 (1997).
