Inyección de moscas drosophila adultas: un método de entrega de compuestos o etiquetas
Published: April 30, 2023
Abstract
Fuente: Nazario-Toole, A. E., Wu, L. P. Evaluación de la respuesta inmune celular de la mosca de la fruta, Drosophila melanogaster, Utilizando un ensayo de fagocitosis in vivo. J. Vis. (2019).
Este video describe cómo realizar una inyección de moscas adultas vivas e incluye un protocolo de ejemplo en el que las partículas etiquetadas y el azul trypan se inyectan en los abdomens de mosca para adivino fagocitosis.
Protocol
Este protocolo es un extracto de Nazario-Toole y Wu, Evaluación de la Respuesta Inmune Celular de la Mosca de la Fruta, Drosophila melanogaster, Utilizando un ensayo de fagocitosis in vivo, J. Vis. Exp. (2019). 1. Preparar partículas de fluoresceína para inyección Reconstituir 10 mg de partículas de bacterias muertas por calor disponibles comercialmente etiquetadas con fluoresceína (ver Tabla de Materiales)a una concentración de stoc…
Materials
| 5430-10 PicoNozzle Kit | World Precision Instruments | 5430-10 | Holder for 1.0mm pipette |
| E. coli (K-12 Strain) BioParticles, Fluorescein conjugate | Invitrogen | E2861 | Killed E. coli labeled with FITC (Fluorescein). Use to test phagocyte recogntion and uptake of gram-negative bacteria. (~494/~518 nm) |
| Needle Pipette Puller | David Kopf Instruments | Model 725 | |
| Pneumatic PicoPump PV820 | World Precision Instruments | SYS-PV820 | The World Precision Instruments Pneumatic PicoPump PV820 uses differential pressures to hold liquid in the glass needle between injections. The user manually controls short bursts of gas pressure to expel the liquid – allowing delivery of sub-nanoliter volumes. The amount of liquid delivered depends on two main variables – the size of the glass needle opening and the amount of time injection pressure is applied. set the instrument to 100 ms "TIMED" mode. |
| Thin Wall Glass Capillaries | World Precision Instruments | TW100F-3 | Needles for injection. OD = 1.0 mm |
| Trypan Blue Solution (0.4%) | Sigma | T8154 | Used to quench extracellular fluorescence of Fluorescein, Alexa Fluor, or Texas Red labeled particles. |
Cite This Article
Injection of Adult Drosophila Flies: A Method of Compound or Label Delivery. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20113, doi: (2023).