Screening for Genomic Modifications: A Method to Identify CRISPR-Generated Mutants in <em>Drosophila</em>

doi:10.3791/20110

JoVE Journal > Biology

Please note that all translations are automatically generated. Click here for the English version.

Biology

Screening op genomische modificaties: een methode om CRISPR-gegenereerde mutanten in Drosophila te identificeren

Published: April 30, 2023

Abstract

Bron: Du, L., et al. Een efficiënte strategie voor het genereren van weefselspecifieke binaire transcriptiesystemen in Drosophila door genoombewerking. J.Vis. Exp. (2018).

Deze video beschrijft een screeningsmethode om transgene Drosophila-vliegen te identificeren, waarvan het genoom is gewijzigd met CRISPR-Cas9. CRISPR-Cas9 is een krachtige genoombewerkingstool die een revolutie teweegbracht in de manier waarop wetenschappers het genoom van een organisme kunnen manipuleren. In het voorbeeldprotocol zullen we zien hoe crispr-gegenereerde mutanten kunnen worden geïdentificeerd, waarbij het inbrengen van een transactiveringssequentie de eerste exon van het branchless (bnl) gen vervangt, waardoor een bnl-genspecifieke driverlijn ontstaat, bnl-LexA.

Protocol

Dit protocol is een fragment uit Du et al., An Efficient Strategy for Generating Tissue-specific Binary Transcription Systems in Drosophila by Genome Editing, J. Vis. Exp. (2018). 1. Vlieggenetica en screening (figuur 1 en figuur 2) Wanneer de geïnjecteerde embryo’s zich ontwikkelen tot volwassenen, kruis dan elke enkele G0-vliegen naar balancervliegen. Selecteer een geschikte balancer voor het chromosoom dat het beoogde allel bevat. V…

Representative Results

Figuur 1: Een overzicht van de workflow voor CRISPR/Cas9-gemedieerde genoombewerking om een binair transcriptiesysteem te genereren. De geschatte tijdsduur die nodig is voor elke stap wordt aangegeven. Klik hier om een grotere versie van deze afbeelding te bekijken. <img alt="Figure 2" class="xfigimg" s…

Materials

Tris-HCl	Sigma Aldrich	T3253	Molecular Biology
EDTA	Sigma Aldrich	E1161	Molecular Biology
NaCl	Sigma Aldrich	S7653	Molecular Biology
UltraPure DNase/RNase-Free Water	ThermoFisher Scientific	10977-023	Molecular Biology
Primers	IDT-DNA		PCR
Proteinase K	ThermoFisher Scientific	25530049	Molecular Biology
2x PCR PreMix, with dye (red)	Sydlab	MB067-EQ2R	Molecular Biology
MKRS/TB6B	Kornberg lab		Fly line
CO2 station	Genesee Scientific	59-122WCU	fly pushing
Stereo microscope	Olympus	SZ-61	fly pushing
Microtube homogenizing pestles	Fisher-Scientific	03-421-217	genomic DNA isolation

Play Video

PDF

DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite This Article

Screening for Genomic Modifications: A Method to Identify CRISPR-Generated Mutants in Drosophila. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20110, doi: (2023).