Screening auf Genommodifikationen: Eine Methode zur Identifizierung von CRISPR-generierten Mutanten in Drosophila
Published: April 30, 2023
Abstract
Quelle: Du, L., et al. An Efficient Strategy for Generating Tissue-specific Binary Transcription Systems in Drosophila by Genome Editing. J. Vis. (2018).
Dieses Video beschreibt eine Screening-Methode zur Identifizierung transgener Drosophila-Fliegen, deren Genom mit CRISPR-Cas9 modifiziert wurde. CRISPR-Cas9 ist ein leistungsstarkes Genom-Editing-Tool, das die Art und Weise revolutioniert hat, wie Wissenschaftler das Genom eines Organismus manipulieren können. Im Beispielprotokoll werden wir sehen, wie CRISPR-generierte Mutanten identifiziert werden können, bei denen ein Einfügen einer Transaktivierungssequenz das erste Exon des zweiglosen (bnl) Gens ersetzt und so eine bnl-genspezifische Treiberlinie, bnl-LexA, erzeugt.
Protocol
Dieses Protokoll ist ein Auszug aus Du et al.,An Efficient Strategy for Generating Tissue-specific Binary Transcription Systems in Drosophila by Genome Editing, J. Vis. Exp. (2018). 1. Fliegengenetik und Screening (Abbildung 1 und Abbildung 2) Wenn sich die injizierten Embryonen zu Erwachsenen entwickeln, kreuzen Sie jede einzelne G 0-Fliegen, um Diefliegtzuder zu werden. Wählen Sie den geeigneten Balancer für das Chromosom aus, das das Zielall…
Representative Results
Abbildung 1: Eine Übersicht über den Workflow für die CRISPR/Cas9-vermittelte Genombearbeitung, um ein binäres Transkriptionssystem zu generieren. Die ungefähre Zeitdauer, die für jeden Schritt erforderlich ist, wird angegeben. Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen. <p class="jove_…
Materials
| Tris-HCl | Sigma Aldrich | T3253 | Molecular Biology |
| EDTA | Sigma Aldrich | E1161 | Molecular Biology |
| NaCl | Sigma Aldrich | S7653 | Molecular Biology |
| UltraPure DNase/RNase-Free Water | ThermoFisher Scientific | 10977-023 | Molecular Biology |
| Primers | IDT-DNA | PCR | |
| Proteinase K | ThermoFisher Scientific | 25530049 | Molecular Biology |
| 2x PCR PreMix, with dye (red) | Sydlab | MB067-EQ2R | Molecular Biology |
| MKRS/TB6B | Kornberg lab | Fly line | |
| CO2 station | Genesee Scientific | 59-122WCU | fly pushing |
| Stereo microscope | Olympus | SZ-61 | fly pushing |
| Microtube homogenizing pestles | Fisher-Scientific | 03-421-217 | genomic DNA isolation |
Cite This Article
Screening for Genomic Modifications: A Method to Identify CRISPR-Generated Mutants in Drosophila. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20110, doi: (2023).