Мышиной модели CD40-активации В-клеток

Исследование клеток показало, что CD40 активации улучшает их презентации антигена мощности. При стимуляции с интерлейкина-4 и CD40 лиганда (CD40L), человеческих клеток может быть расширена без трудностей из небольшого количества периферической крови в течение 14 дней до очень большого количества высоко-чистые CD40-лимфоцитов (> 10⁹ Клеток на пациента) от здоровых доноров, а также у больных раком^1-4. CD40-B клетки экспрессируют важно лимфатических узлов самонаведения молекул и может привлекать Т-клетки<em> В пробирке</em⁵. Кроме того, они эффективно заниматься, обрабатывать и представлять антигены Т-клеткам^6,7. CD40-лимфоциты были показаны не только простые наивные, но и расширяют ячеек памяти T^8,9. Поэтому CD40-активированных В-клеток (CD40-лимфоцитов) были изучены в качестве альтернативного источника иммуно-стимулирующего антиген-представляющих клеток (АПК) для клеточной immunotherapy1, 5,10. В целях дальнейшего исследования ли-CD40 В-клеток индуцировать эффективный Т-клеточные реакции в естественных условиях и для изучения основной механизм мы создали систему культуры клеток для создания мышиной CD40-активированных В-клеток. Использование спленоцитов или очищенной В-клеток C57BL / 6 мышей для CD40-активации, оптимальные условия были определены следующим образом: Начиная с спленоцитов C57BL / 6 мышей (гаплотип H-2b) лимфоциты очищают центрифугирования в градиенте плотности и со-культивировали с HeLa клеток, экспрессирующих рекомбинантный мышиный CD40 лиганд (tmuCD40L HeLa)¹¹. Клетки recultured каждые 3-4 дня и ключевые компоненты, такие как CD40L, интерлейкин-4,-меркаптоэтанол и циклоспорин пополняются. В этом протоколе мы покажем, как получить полностью активирована мышиной CD40-лимфоцитов (mCD40B) с аналогичными APC-фенотип человека к CD40-лимфоцитов (рис. 1а, б). CD40-стимуляция приводит к быстрому нарост и расширения высокой чистоты (> 90%), CD19 +-клеток в течение 14 дней культуры клеток (рис. 1в, г). Во избежание загрязнения с неправительственными организациями, трансфицированных клеток, экспрессия мышиного CD40 лиганда на трансфектантов должен находиться под контролем регулярно (рис. 2). Мышиного CD40 активированных В-клеток может быть использована для изучения В-клеточной активации и дифференциации, а также исследовать их потенциал, чтобы функции, как APC в пробирке и в естественных условиях. Более того, они представляют собой перспективный инструмент для создания терапевтических или профилактических прививок против опухолей и поможет ответить на вопросы относительно безопасности и иммуногенности этого подхода¹².