Modèle murin de CD40-activation des cellules B

La recherche sur les cellules B CD40 a montré que l'activation améliore leur capacité de présentation antigénique. Lorsqu'ils sont stimulés par l'interleukine-4 et CD40 ligand (CD40L), les lymphocytes B humains peut être étendu sans difficulté à partir de petites quantités de sang périphérique dans les 14 jours pour très grandes quantités de très-pur-CD40 des cellules B (> 10⁹ Cellules par patient) provenant de donneurs sains ainsi que des patients atteints de cancer^1-4. Cellules CD40-B expriment des molécules importantes ganglion homing et peuvent attirer les cellules T<em> In vitro</em⁵. En outre, ils prennent efficacement, le processus et présentent les antigènes aux cellules T^6,7. Cellules CD40-B ont été montrés pour non seulement naïve écoute, mais également d'élargir la mémoire des lymphocytes T^8,9. Par conséquent CD40-activé des cellules B (CD40-cellules B) ont été étudiés comme une source alternative de l'immuno-stimulation des cellules présentatrices d'antigènes (APC) à base de cellules immunotherapy1, 5,10. Afin d'étudier plus avant si les cellules CD40-B induisent des réponses efficaces cellules T in vivo et d'étudier le mécanisme sous-jacent, nous avons établi un système de culture cellulaire pour la génération de cellules murines B CD40-activé. Utiliser splénocytes ou purifiée cellules B de souris C57BL / 6 pour les CD40-activation, les conditions optimales ont été identifiées comme suit: A partir de splénocytes de souris C57BL / 6 (haplotype H-2b) de lymphocytes sont purifiées par centrifugation sur gradient de densité et de co-cultivées avec des cellules HeLa cellules exprimant recombinant murin CD40-ligand (tmuCD40L HeLa)¹¹. Les cellules sont repiquées tous les 3-4 jours et les composants clés tels que CD40L, l'interleukine-4,-mercaptoéthanol et la cyclosporine A sont reconstituées. Dans ce protocole, nous montrons comment obtenir pleinement activé murin CD40-cellules B (mCD40B) avec APC-phénotype similaire aux humains CD40 des cellules B (figure 1a, b). CD40-stimulation conduit à une excroissance rapide et l'expansion de la très pure (> 90%) CD19 + cellules B dans les 14 jours de culture cellulaire (figure 1c, d). Pour éviter la contamination par des cellules non transfectées, l'expression du ligand CD40 murin sur les transfectants doit être contrôlée régulièrement (figure 2). Murin CD40-activé des cellules B peut être utilisé pour étudier activation des cellules B et la différenciation ainsi que d'étudier leur potentiel de fonctionner comme APC in vitro et in vivo. Par ailleurs, ils représentent un outil prometteur pour l'établissement de la vaccination thérapeutique ou préventive contre les tumeurs et aideront à répondre aux questions concernant la sécurité et l'immunogénicité de cette approche¹².