Il ultracentrifuga analitica (AUC) delle cellule del campione tiene campione e tampone di riferimento e durante gli esperimenti, ed è esposto a alto vuoto e velocità del rotore fino a 60.000 giri al minuto. Questo video dimostra l'attenzione rigorosa ai dettagli necessari per l'assemblaggio, il caricamento e l'allineamento di questa componente molto importante di un esperimento AUC.
Il ultracentrifuga analitica (AUC) è un potente strumento biofisico che ci permette di registrare profili sedimentazione macromolecolare durante la centrifugazione ad alta velocità. Se correttamente progettato ed eseguito, una velocità di sedimentazione AUC o esperimento equilibrio di sedimentazione in grado di rivelare una grande quantità di una proteina in quanto a dimensioni e la forma, la purezza del campione, coefficiente di sedimentazione, afferma oligomerizzazione e interazioni proteina-proteina.
Questa tecnica, tuttavia, richiede un livello di attenzione rigorosa tecnica. Celle campione possesso di un pezzo sectored centro a sandwich tra due assemblee finestra. Essi sono sigillati con una pressione di coppia di circa 120-140 in / lbs. Tampone e del campione vengono caricati nei settori centrale e poi, dopo di tenuta, le cellule sono perfettamente allineati in un rotore in titanio in modo che i sistemi di rilevamento ottico di scansione sia di esempio e di buffer di riferimento sulla linea mediana stesso percorso radiale attraverso ogni settore centrale durante la rotazione a velocità fino a 60, 000 giri al minuto e sotto vuoto molto alto
Non solo è corretto montaggio cella campione critici, i componenti delle cellule del campione sono molto costosi e devono essere adeguatamente curato per garantire che siano in ottimali condizioni di lavoro al fine di evitare perdite e rotture durante gli esperimenti. Maneggiare con cura le finestre, perché anche la minima crepa o graffio può portare alla rottura nella centrifuga. Il contatto tra il centro e le finestre devono essere il più stretto possibile, cioè gli anelli di Newton non s dovrebbe essere visibile dopo che la pressione viene applicata una coppia. Polvere, lanugine, graffi e oli su entrambi i finestrini o il fulcro ogni compromesso questo contatto e può facilmente portare a perdite di soluzioni da un settore all'altro o fuoriuscire il centro tutti insieme. Non solo i campioni preziosi persi, perdite di soluzioni durante un esperimento causerà uno squilibrio di pressione nella cella che spesso porta a vetri rotti e centrotavola. Inoltre, guarnizioni spina e prese alloggio deve essere saldamente in atto per evitare soluzioni di essere tirato fuori dal settore centrale attraverso i fori di carico dal vuoto spinto nella camera di centrifuga. Rivestimenti finestra e le guarnizioni devono essere privi di rotture e crepe che potrebbero causare il movimento con conseguente rottura dei vetri.
Questo video dimostra le nostre procedure di assemblaggio campione di cellule, di coppia, il caricamento e l'allineamento del rotore per ridurre al minimo i danni ai componenti, la soluzione di perdite e rotture durante l'esperimento perfetto AUC.
L'assemblea cellula corretta, l'inserimento del campione e l'allineamento delle cellule nel rotore è fondamentale per gli esperimenti di alta qualità AUC. Questo è vero, in particolare, per esperimenti che richiedono un'analisi molto dettagliata dei dati acquisiti su profili sedimentazione del macromolecolari, per esempio, quando si studiano le interazioni delle proteine e determinare gli importi globali traccia. Spesso la qualità della configurazione sperimentale è limitante per l'accuratezza e la precisione dei risultati dello studio AUC. Per i dettagli sulla progettazione pratica e l'ulteriore esecuzione di esperimenti AUC, vedere Riferimenti 1 – 3. Workshop che copre la configurazione pratica, teoria e analisi dei dati di esperimenti AUC si terranno due volte l'anno presso il nostro laboratorio presso il National Institutes of Health [4].
Riconosciamo l'appoggio di ricerca dal Programma di Ricerca Intramurale NIBIB, NIH.
Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
---|---|---|---|---|
4-place Ti analytical rotor | Beckman Coulter | 361964 | ||
Torque stand assembly | Beckman Coulter | 361318 | ||
Cell alignment tool | Beckman Coulter | 362340 | ||
Spinkote Lubricant | Beckman Coulter | 306812 | ||
Counterbalance | Beckman Coulter | 360219 | ||
Cell Housing kit | Beckman Coulter | 334602 | ||
Window gasket | Beckman Coulter | 327021 | ||
Window liner | Beckman Coulter | 362329 | ||
Window, sapphire | Beckman Coulter | 307177 | ||
Window, quartz | Beckman Coulter | 301730 | ||
Window holder | Beckman Coulter | 305037 | ||
12mm double sector Epon centerpiece | Beckman Coulter | 306493 | ||
Cell plug gaskets | Beckman Coulter | 327022 | ||
Cell housing plug | Beckman Coulter | 362327 |