Die analytischen Ultrazentrifuge (AUC) Probenzelle hält Probe und Referenz-Puffer und während der Experimente und eine hohe Vakuum-und Rotor-Geschwindigkeiten von bis zu 60.000 Umdrehungen pro Minute ausgesetzt. Dieses Video startet den viel Liebe zum Detail, die für Montage, Be-und Ausrichtung dieses sehr wichtige Komponente einer AUC Experiment demonstrieren.
Die analytischen Ultrazentrifuge (AUC) ist ein leistungsfähiges Werkzeug, das uns biophysikalischen makromolekulare Sedimentation Profile während Hochgeschwindigkeitszentrifugation aufnehmen können. Wenn sie richtig geplant und ausgeführt, kann ein AUC Sedimentationsgeschwindigkeit oder Sedimentationsgleichgewicht Experiment sehr viel über ein Protein in Bezug auf Größe und Form, Muster Reinheit, Sedimentationskoeffizient, Oligomerisierung Staaten und Protein-Protein-Wechselwirkungen zeigen.
Diese Technik erfordert jedoch eine strenge Niveau der technischen Aufmerksamkeit. Beispiel Zellen Besitz eines sectored Kernstück zwischen zwei Glasscheiben eingeschlossen. Sie sind mit einem Drehmoment Druck von etwa 120-140 in / lbs versiegelt. Referenz-Puffer und Probe werden in den Mittelpunkt Sektoren geladen und dann nach der Versiegelung werden die Zellen genau in einem Titan-Rotor so ausgerichtet, dass die optische Detektion Systeme scannen beide Probe und Referenz-Puffer in der gleichen radialen Weg Mittellinie durch jede Herzstück Sektor während der Rotation bei Geschwindigkeiten von bis zu 60 000 Umdrehungen pro Minute und unter sehr hohem Vakuum
Nicht nur ist die richtige Probenzelle Montage kritisch sind Probenzelle Komponenten sehr teuer und muss richtig gepflegt werden, um sicherzustellen, dass sie in optimale Arbeitsbedingungen Voraussetzung, um Lecks und Brüche während der Experimente zu vermeiden. Handle Fenster sorgfältig, denn selbst die kleinste Riss oder Kratzer zu einem Bruch in der Zentrifuge führen kann. Der Kontakt zwischen Kernstück und Fenster müssen so dicht wie möglich, dh keine Newton s Ringe sichtbar sein soll, nachdem Drehmoment Druck ausgeübt wird. Staub, Flusen, Kratzer und Öle entweder auf die Fenster oder das Herzstück aller Kompromisse diesen Kontakt und kann sehr einfach an der undichten Lösungen von einem Sektor zum anderen oder ein Auslaufen der Mittelpunkt allen zusammen zu führen. Nicht nur die wertvollen Proben verloren, Auslaufen von Lösungen während eines Experiments wird ein Ungleichgewicht der Druck in der Zelle führt oft zu Glasbruch und Mittelstücke verursachen. Darüber hinaus müssen Plug Dichtungen und Gehäuse Stecker fest an seinem Platz, um Lösungen Herausziehen des Mittelstücks Sektor durch die Be-Löcher durch das Hochvakuum in der Zentrifugenkammer zu vermeiden. Fenster-Liner und Dichtungen müssen frei von Brüchen und Rissen dazu führen, dass Bewegung die sich in zerbrochenen Fenstern konnte.
Dieses Video wird unser Verfahren der Messküvette Montage zu demonstrieren, zu minimieren Drehmoment, Be-und Rotor-Ausrichtung, um Komponenten beschädigt, Lösung undicht und Bruch während des perfekten AUC Experiment.
Die richtige Zellverband, Probe Insertion und Ausrichtung der Zellen in der Rotor ist entscheidend für die hohe Qualität AUC Experimente. Dies gilt insbesondere für Experimente, die eine sehr detaillierte Analyse der erfassten Daten über die makromolekulare Sedimentation Profile erfordern, z. B. beim Studium Protein-Interaktionen und die Bestimmung Spur Gesamtbeträge. Oft ist die Qualität der Versuchsaufbau ist für die Genauigkeit und Präzision der Ergebnisse aus der AUC Studie begrenzen. Für Einzelheiten über die praktische Design und die weitere Ausführung des AUC Experimente finden Sie unter Referenzen 1 bis 3. Workshops zu den praktischen Aufbau, Theorie und Datenanalyse von AUC Experimente werden zweimal im Jahr in unserem Labor an der National Institutes of Health [4].
Wir erkennen die Unterstützung der Forschung durch die Interne Research Program der NIBIB, NIH.
Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
---|---|---|---|---|
4-place Ti analytical rotor | Beckman Coulter | 361964 | ||
Torque stand assembly | Beckman Coulter | 361318 | ||
Cell alignment tool | Beckman Coulter | 362340 | ||
Spinkote Lubricant | Beckman Coulter | 306812 | ||
Counterbalance | Beckman Coulter | 360219 | ||
Cell Housing kit | Beckman Coulter | 334602 | ||
Window gasket | Beckman Coulter | 327021 | ||
Window liner | Beckman Coulter | 362329 | ||
Window, sapphire | Beckman Coulter | 307177 | ||
Window, quartz | Beckman Coulter | 301730 | ||
Window holder | Beckman Coulter | 305037 | ||
12mm double sector Epon centerpiece | Beckman Coulter | 306493 | ||
Cell plug gaskets | Beckman Coulter | 327022 | ||
Cell housing plug | Beckman Coulter | 362327 |