فأري موديل الإسكيمية Hindlimb
Summary
وأظهرت عملية جراحية لتحريض نقص التروية hindlimb من جانب واحد ، مع التأكيد على نقص التروية التصوير بواسطة الليزر دوبلر الارواء.
Abstract
في الولايات المتحدة ، والشرايين الطرفية المرض (PAD) يصيب نحو 10 مليون شخص ، وأيضا في جميع أنحاء العالم انتشارا. وتقتصر علاجات طبية لتخفيف الأعراض. التدخلات الجراحية أو اللف مفيدة لبعض الأفراد ، ولكن على المدى الطويل وغالبا ما تكون النتائج مخيبة للآمال. نتيجة لذلك ، هناك حاجة لتطوير علاجات جديدة لعلاج PAD. ونقص التروية hindlimb الفئران إعداد نموذج للPAD ، ومفيد لاختبار علاجات جديدة. بالمقارنة مع نماذج أخرى من نقص تروية الأنسجة مثل ربط الشريان التاجي أو الدماغية ، ربط الشريان الفخذي ينص على أبسط نموذج من الأنسجة الدماغية. المزايا الأخرى لهذا النموذج هي سهولة الوصول إلى شريان الفخذ وانخفاض معدل الوفيات.
في هذا الفيديو ، ونحن لشرح منهجية لهذا النموذج من الفئران الإسكيمية hindimb من جانب واحد. وسيتم وصف المواد وإجراءات محددة لإنشاء وتقييم هذا النموذج ، بما في ذلك تقييم التروية أطرافهم بواسطة الليزر دوبلر التصوير. ويمكن أيضا أن تستخدم هذا البروتوكول لزرع وتتبع غير الغازية من الخلايا ، وهو ما يتضح من هوانغ وآخرون 1.
Protocol
Discussion
هناك بعض المصادر لتقلب للنظر في حين تخطيط وتنفيذ نماذج hindlimb نقص التروية. أولا ، قد يكون مستوى الإسكيمية تختلف وفقا لموقع ربط فيما يتعلق بذلك من الفروع الجانبية. لذلك ، لاتساق النموذج ، ينبغي أن تخضع هذه الحيوانات على نفس المستوى من ربط الشرايين. ويرتبط مصدر آخر للتقلبات في الانتعاش الدماغية إلى سن هذه الحيوانات ، مع صغار الحيوانات (6-8 أسابيع من العمر) وجود معدلات الاسترداد بشكل أسرع وأكثر اكتمالا من أقدم الحيوانات (8-10 شهرا) ، وفقا لتقييم الدورة الدموية (أي الليزر دوبلر التروية) أو وظيفية (أي اختبار مفرغه) التدابير. للدراسات في واحد الذي هو تقييم وكيلا عائية ، فإنه قد يكون من الأفضل استخدام الحيوانات الأكبر سنا ، لأنه قد يكون لاحظ الفرق بين أكبر المجموعات التي لها التدخل العلاجي. على العكس ، للدراسات في واحد الذي هو عامل تقييم المضادة للعائية ، فإنه قد يكون من الأفضل استخدام الحيوانات الأصغر سنا لتعظيم تأثير حجم 3.
إذا أجريت بشكل صحيح ، يجب أن يكون هناك الحد الأدنى من مضاعفات مثل النزيف ، العدوى ، أو وفيات. إذا كان النزيف يحدث عن اضطراب عرضية من الوريد الفخذي أو غيرها من السفن ، وضغط معتدل مع قطعة من القطن المعقم يميل يجب تطبيقها قضيب أو الشاش لموقع نزف حتى يتوقف النزيف. ينبغي معاملة الحيوانات التي تظهر عليها علامات العدوى مع وكلاء المضادة للعدوى. قد الحيوانات العارضة الغرغرينا كبيرة تحتاج إلى beeuthanized. هذا التعقيد هو أكثر شيوعا في كبار السن الحيوانات ، وكذلك في بعض السلالات ، مثل الفئران BALB ج 4 بالإضافة إلى ذلك ، قد يكون النموذج الإسكيمية hindlimb تسبب الألم الخفيف إلى المعتدل. لذا ، ينبغي أن تدار مثل المسكنات أو البوبرينورفين كاربروفين حسب الحاجة لعلاج الألم ، وفقا لتوصيات IACUC.
في الختام ، لقد أثبتنا طريقة بسيطة وقابلة للتكرار لدراسة PAD في نموذج الفئران من نقص التروية hindlimb. نموذج الإسكيمية hindlimb مع تحليل ليزر التصوير دوبلر هو نظام ممتاز لدراسة أمراض الأوعية الدموية لتقييم المرشحين والعلاجية.
Acknowledgements
المؤلفان بالشكر اندريا Axtell ، إيتوه ساتوشي ، MD ، Velotta جيف ، MD ، هويت غرانت ، روبرت روبنز C. ، MD ، يو جين ، MD ، تيم دويل ، دكتوراه ، والتصوير ستانفورد الحيوانات الصغيرة الأساسية للحصول على المساعدة التقنية. الكتاب أيضا أن أشكر AM بيكفورد ، وشركة للحصول على الدعم من المعدات البيطرية. وأيد هذا البحث عن طريق المنح البحثية من المعاهد الوطنية للصحة (R01 HL – 75774 ، CA098303 R01 ، R21 HL085743 ، 1K12 HL087746) ، والتبغ كاليفورنيا بحوث أمراض ذات صلة برنامج من جامعة كاليفورنيا (15IT – 0257 و1514RT 0169) ، ومعهد كاليفورنيا للطب التجديدي (RS1 – 00183). معتمد من قبل NH الزمالة من جمعية القلب الاميركية.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Surgical Tools | Tool | Fine Science Tools | ||
| Constix Cotton Swabs | Tool | Contec | SC-4 | |
| Betadine (Povidone-iodine) | Reagent | PDI | ||
| 70% alcohol | Reagent | Kendall | ||
| Phosphate Buffered Saline | Reagent | Invitrogen | ||
| 7-0 silk suture | Tool | Genzyme | ||
| 5-0 vicryl suture | Tool | Ethicon | ||
| Electric shaver | Tool | GE | ||
| Cautery | Tool | Baxter | ||
| Laser Doppler and PeriScan PIM 3 System | Equipment | Perimed |
References
- Huang, N. F., Niiyama, H., De, A., Cooke, J. P., , . Transplantation and non-invasive tracking of embryonic stem cell-derived endothelial cells for treatment of hindlimb ischemia. J Vis Exp. , (2008).
- Cook, M. J. . The anatomy of the laboratory mouse. , (1976).
- Niiyama, H., Kai, H., Yamamoto, T., Shimada, T., Sasaki, K., Murohara, T., Egashira, K., Imaizumi, T. Roles of endogenous monocyte chemoattractant protein-1 in ischemia-induced neovascularization. J. Am. Coll. Cardiol. 44, 661-666 (2004).
- Dokun, A. O., Keum, S., Hazarika, S., Li, Y., Lamonte, G. M., Wheeler, F., Marchuk, D. A., Annex, B. H. A quantitative trait locus (LSq-1) on mouse chromosome 7 is linked to the absence of tissue loss after surgical hindlimb ischemia. Circulation. 117, 1207-1215 (2008).
