の気管内の管理<em>インフルエンザ菌</em>マウスモデルにおいて気道炎症を研究します
Summary
We demonstrate the procedure for intra-tracheal inoculation of Haemophilus influenzae into the lower respiratory tracts of mice. This is a very useful tool to study signaling pathways that regulate airway inflammation in mouse models.
Abstract
ここでは、効率的かつ直接的にインフルエンザ菌を提供するための詳細な手順について説明します マウスの下気道へ。我々は、Hを調製するための手順を示しますインフルエンザ接種 、Hの気管内点滴注入示差遺伝子発現分析のために、肺、気管支肺胞洗浄液（BALF）を収集、BALF中の免疫細胞の分析、およびRNA単離にインフルエンザ 。この手順は、任意の細菌、ウイルスまたは真菌に対する肺の炎症反応を研究するために使用することができます。あまり曖昧で、それがより効率的に下気道への細菌接種を実現しているため直接気管点滴注入は、主に鼻腔内またはエアロゾル吸入手順よりも好ましいです。
Introduction
炎症は、感染性病原体に対する防御の基本的な免疫機構です。これは、病原体の根絶や損傷を受けた組織の修復を促進します。また、正常な健康状態1への回復を促進します。しかしながら、調節不全の炎症は、多くの場合、慢性炎症性疾患2に導きます。気道炎症は、慢性閉塞性肺疾患（COPD）、喘息および肺線維症3などの異なる肺疾患の初期のトリガーです。
非分類できる（カプセル化されていない） インフルエンザ菌 （のNTHi）は、慢性上下の肺の炎症性疾患4,5に関連しています。これは、慢性閉塞性肺疾患の4,6,7の小児および成人の下気道から単離された優占種です。 NTHi感染後の炎症反応は、（例えば、TNFおよびIL-1βなどの）炎症性サイトカインを上方制御することを特徴とする、それはB媒介されますyのマイトジェンは、Toll様受容体（TLR）8を介してタンパク質キナーゼ（MAPK）および核因子κB（NF-κB）を活性化しました。
マウスモデルが異なるため遺伝子欠損株の入手可能性の肺の炎症性疾患の根底にある病理を分析するために非常に便利なツールです。いくつかの方法は、生/弱毒化細菌および鼻腔内滴下し、エアロゾル化した吸入9,10などの細菌産物を、接種するために使用されています。ここでは、気管内点滴注入を実証します。あまり頻繁に使用されますが、このアプローチは、より効率的であるため下気道への接種物の直接送達の再現性が高いです。
Protocol
Representative Results
Discussion
ここで、我々は、細菌性の肺病原体にマウスの肺を接種するためにユニークな低侵襲の手順を説明します。我々は、この手順では、炎症性シグナル伝達経路の遺伝子が欠損しているマウスを用いて異なる遺伝子の機能を研究するために使用することができることを示しています。この手順はまた、ウイルスおよび真菌肺感染に対する炎症応答を研究するために使用することができます。この?…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
We thank Dr. Carson Harrod for critical reading of the manuscript. We also thank Mr. Minghui Zeng and Drs. Mahesh Kathania and Prashant Khare for their contributions. This work was supported by grants from the American Cancer Society (Research Scholar grant, 122713-RSG-12-260-01-LIB) and the Sammons Cancer Center (Pilot Project grant) to K. Venuprasad.
Materials
| Chocolate agar plate | Fisher Scientific | CAS50-99-7 | |
| Dextrose Anhydrous | Themo Scientific | R01300 | |
| Heparin | Hospira,Inc | RL-3010 | |
| Deft quick solution | Sigma | GS500-500ML | |
| Syringe needle 20/26G | BD | (REF305115/175) | |
| Iml syringe | BD | REF 309602 | |
| Catheter 20GA | BD | REF 381433 | |
| Dissecting Scissors, straight, 10 cm long | kentscientific | INS600393 | |
| Iris Forceps, serrated, 10cm long | kentscientific | INS650915 | |
| Tweezer #5 Stainless steel, 11cm long | kentscientific | INS600095 | |
| 10% Formalin | Fisher Scientific | CAS 67-56-1 | |
| Agarose | peqlab | 35-1020 | |
| 5ml polystyrene round-bottom tubes | BD | REF 352058 | |
| 1.5 ml Microcentrifuge tubes | Light Labs | A-7001-R | |
| Reasy Mini kit | Qiagen | 74104 | |
| Pellet pestile motor (Tissue homoginizer) | Sigma | Z359971-1EA | |
| 96 well microtiter plates V bottom | Thermo | 2605 | |
| 1X PBS | Gibco | 10010-023 | |
| OneComp eBeads | eBioscience | 01-1111-42 | |
| CD45.2-APC | eBioscience | 17-0454-81 | Working dilution 1:100 |
| Ly-6G-eFlor 450 | eBioscience | 48-5931-82 | Working dilution 1:100 |
| BSA | HyClone | SH30574.03 | |
| RBC Lysis Buffer (10X) | Biolegend | 420301 | |
| Live/Dead fixable aqua dead cell stain kit | Invitrogen | L-34957 | |
| EDTA (0.5M) | lifetechnologies | 15575-020 | |
| CD16/CD32 FcBlock | BD | 553142 | |
| Facs tubes polystyrene round bottom tube | BD | 352052 | |
| Formaldehyde | Polyscience | 4018 |
Referências
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