Deney genel şeması Şekil 1'de gösterilmiştir. 1. Hayvan hazırlık ve davranışsal bir laboratuvara transfer Laboratuarda, davranış set-up hazırlamak: davranışsal testler sırasında ödül olarak hizmet pelet, farklı test kurullarının kuyulardan (Aşağıdaki testler 1 ila 3) doldurunuz. Maymun grubu konut odasından bir transfer kafes içine aktarın. Maymun kafası sonraki konumlandırma, primat sandalye erişim sağlayan bir tünel girmek için eğitilmiştir. Primat sandalye laboratuvara aktarılmadan önce maymun ağırlığı ölçülür. 2. Test 1: Modifiye Brinkman kurulu Bu test, modifiye ve 4,5 önceki raporlardan adapte her davranış oturumda yapılacak referans temel davranış iştir. (2 ilan olasılığı da set-up yukarıdaki dijital kamera ile video kaydı başlatın.ve ditional kameralar, yönetim kurulu her iki tarafında biri) Brinkman kurulu önünde maymun yerleştirin. Sağ el erişimi vermek için primat sandalyeye örneği sağ pencerede açın. Sağ elini kullanarak, maymun, 50 slot (25 dikey ve yatay 25) gıda pelet alır. Testin tamamlanmasından sonra, sağ pencerede ve dolum granül kurulu kapatın. Sol penceresini açın ve sol el için testi tekrarlayın. Testin sonunda bir kaç kuru üzüm ya da badem, tüm günlük oturumu sırasında motivasyonunu korumak için her testin sonunda tekrarlanacak bir prosedür ile hayvan ödüllendirin. Ek bilgi: Üç dijital video kameralar, off-line işlem sırasını kaydetmek için kullanılır, (kavrama yaparken parmakların pozisyonu tam olarak değerlendirmek için) yönetim kurulu her iki tarafta tahta üzerinde, biri yerleştirilir. Aynı günlük oturum içinde, incie maymun (haftanın farklı günleri arasında dağıtılmak üzere 2 görev ve / veya görev 3 ve / veya 4 görev olarak) başka bir görevi gerçekleştirebilirsiniz. 1 test için maymun 1 gün sağ eli ile başladı, gün 2 ve böylece sol el ile başlar. Opsiyonel: bir ya da ayrı ayrı ("dominant elin" belirlemek için) sağ eli sol elin performansını karşılaştıran sağlar, diğer yandan yukarıda test uygulandığında, bu eğitimin erken bir aşamada da mümkündür izin maymun, aynı anda iki elinizle görevi gerçekleştirmek. Bir yandan pelet kavramak için diğerinden daha daha sık kullanılması durumunda, o zaman "tercih el" olarak kabul edilebilir. 3. Testi 2: Brinkman kutusu (görsel kontrolü olan ve olmayan) Brinkman kutusu 20 kuyu (10 10 dikey ve yatay) oluşmaktadır. 1 testi ile karşılaştırıldığında, maymun hassas gerçekleştirmek için özgürlük düşük derece ile sınırlı bir alanda elle kontrol etmek için vardırkavrama hareketi. Pelet ile yönetim kurulu doldurun ve görsel kontrolü olmaması (dokunsal arama dayanarak) ilk test yapmak için, kutunun üst faset yakın. Brinkman kutusunun önünde maymun yerleştirin. Görsel denetim yokluğunda sol elle test etmek için primat sandalyenin sol penceresini açın. Maymun sırası aşağıdaki kutuya yerleştirilen bir dijital kamera kaydedilirken, 20 pelet almak için çalışır. Primat sandalyenin sol penceresini kapatın. Ttaneli doldurun kurulu. Primat sandalyenin sağ pencerede açın. Görsel denetim yokluğunda sağ eli ile maymun test tekrarlar. Primat sandalyenin sağ penceresini kapatın. Görsel kontrol altında Brinkman kutusunda pelet kavramak yeteneğini test etmek için, kutunun üst faset açın. Yedek kutu pelet ve maymun ile, sağ elini kullanarak test gerçekleştirir. Primat sandalyenin sağ penceresini kapatın. Pelet ile doldurun kutu. </li> Primat sandalyenin sol penceresini açın. Maymun sol hand.Repeat adım 2.5 kullanarak test yapar. 4. Test 3: Döner Brinkman kurulu Bu test, yönetim kurulu maymun (saat yönünde) veya diğer (saat yönünün tersine) yönünde yönetim kurulu deplasman tahmin zorlayarak, dönen dışında Brinkman yönetim kurulu görev (test 1) ile karşılaştırılabilir. Pelet ile yönetim kurulu doldurun. Dizisi set-up (her iki tarafta 2 ek kameralar, bir yere de olasılığı) üzerine yerleştirilen bir dijital kamera ile kaydedilmiş. Primat sandalyenin sağ pencerede açın. Forumun saat yönünde çevirerek ise maymun, dört konsantrik satırlarda dağıtılan 32 kuyu, pelet alır. Doğru penceresini kapatın. Ttaneli doldurun kurulu. Primat sandalyenin sol penceresini açın. Maymun sol el ile 4.2 olarak test yapar. Ise yönetim kurulu i, puan 4,2-4,4 tekrarlayın.(diğer bir yandan sonra saat yönünün tersine çevirerek). 2,5 adımı tekrarlayın. 5. Test 4: Reach çekmece görev ve kavramak Kuvvet oluşturmak için kapasite ile kavrama yeteneği, bu test (6-11 önceki sürümlerinde türetilmiş) birleştirmek için bir yük, maymun, ilk çekmecenin topuzu kavrama kuvveti uygulayarak bir çekmece açmak için sahip olacak şekilde dizayn edilmiştir çekmece içine yerleştirilen bir pelet erişim sağlayan, çekmece açmak için yürürlüğe girmiştir. Çekmece daha hassas kavrama kullanarak, açık kalırken, pelet aynı eli ile alınır. Bir dijital fotoğraf makinesi, off-line veri kontrolü (örneğin hatalı çalışmaların tespiti) için denemeler kayıt, çekmecenin üstüne yerleştirilir. Primat sandalyenin sağ pencerede açın. Maymun sağ kullanarak (her bir direnç seviyesi için en az 5 doğru denemeler), 5 farklı direnç seviyeleri her 10 çalışma gerçekleştirir. Th testi (50 çalışma) tekrarlayın.e elini bıraktı. 2,5 adımı tekrarlayın. Ek bilgi: sonraki davranış günlük oturumunda, hayvan, bir önceki oturumda ilk test yaptığı yandan alternatif. 6. Davranışsal oturumun Sonu O gün öngörülen testlerin tamamlanmasından sonra, testler sırasında alınan pelet yem ve gıda ile maymun ödüllendirmek. Tipik olarak, maymun, tahıl ve meyve alır. Maymun arkadaşları ile grup konut odasına döner. Protokol formu üzerinde yapılan çeşitli testler kesin zamansal dizisi yazılır. 7. Temsilcisi Sonuçlar Yukarıda gösterildiği dört davranışsal testler (Şekil 1), servikal spinal kord lezyonu fonksiyonel iyileşme soruşturma yönelik çalışmaları kapsamında (Fi laboratuvarda yaygın olarak kullanılmaktadırGüre 2A) veya yokluğu veya varlığı bir tedavi motor korteks (Şekil 2B), spontan iyileşme 12-19 artırmak için uygulanır. I) puan, dikey yuvaları için ayrı ayrı sayılır, ilk 30 saniye içinde maymun tarafından alınan pelet sayısına göre verilen: Test 1 (Brinkman kurulu değiştirilmiş) için, analiz iki parametre (Şekil 3 ve Şekil 4A), odaklanmıştır ve yatay yuvası (off-line kaydedilen video dizisi tekrarlayarak), ii) ve pelet parmakları arasındaki temas süresi (süre) olarak tanımlanan temas süresi (BT), (bkz. ayrıca Şekil 6, resimlerin alt serisi .) Pelet dokunma yuvaya ilk parmak (genellikle işaret parmağı) ekleme ve iyi pelet alma başlangıcı arasındaki zaman aralığı. Video dizisi tarafından kare kare oynatırken zaman aralığı ölçülür. CT ilk beş vertic ölçülür.al yuvaları ve ilk beş yatay yuva maymun 16-18 amaçladık. Puan grafikler ilk eğitim aşaması, öncesi lezyon plato, lezyonun hemen sonra dramatik bir düşüş (genellikle sıfır) puan sonrası lezyon yayla yolunda ilerici (spontan) fonksiyonel iyileşme göstermektedir. Fonksiyonel iyileşme, medyan öncesi lezyon skoru (yayla) bölünmesiyle yayla medyan sonrası lezyon skoru oranı% olarak ifade edilir * 100 (Şekil 3 ve Şekil 4A) . Bir artış açığı yansıtır CT,% olarak ifade edilen fonksiyonel iyileşme yayla * 100 medyan sonrası lezyon BT ile bölünmüş öncesi ortalama lezyon CT (yayla) oranıdır. Tedavileri sonrası lezyon, etkisi, 1 test dayalı gösterdi, daha önceki raporlarda bu laboratuvarda 14,15,17 ayrıntılı olarak gösterilmiştir. Bir diğer analiz, strateji sorunu gidermek, yani zamansal sıra yuva m tarafından ziyaretonkey (Şekil 4B). Test – 2 (Brinkman kutu) için, daha anlamlı bir parametre testi 1 puan da kurulmuş olmasına rağmen, ilk yuvasına pelet toplama arasındaki zaman aralığı ve toplama olarak tanımlanan " tam zamanlı " en son (20.) yuvasına pelet (Şekil 5). Fonksiyonel iyileşme hesaplanmış ve% olarak ifade edilebilir. Yayla * 100 medyan toplam süre sonrası lezyon bölünmesiyle öncesi lezyon medyan toplam süre (eğitim aşamasından sonra plato) kullanılarak hesaplanır. (Dönen Brinkman kurulu) testi için 3 puan (test 1) Yukarıda olarak kurulmuş olmasına rağmen, duyarlı bir parametre ilk on yuvaları için ölçülen temas süresi (BT, yukarıda testi 1 olarak tanımlanır), (Şekil 6 .) Test 4 (. Ulaşmak ve kavramak çekmece görev), set-up cdeneme inisiyasyon (el kesmeler panelin önünde yerleştirilmiş bir ışık demeti), topuzu, çekme çekmece başlangıcı, sonu çekmeceyi açıp, yuvaya giren el (pick-dokunmadan el gibi ayrık olaylar kayıt, çeşitli dedektörler omprises ), yuvası (pick-zaman) elle çekilmesi. Topuzu kuvvet dönüştürücüler, kavrama gücü (topuzu basarak başparmak ve işaret parmağı tarafından uygulanan) ve yük kuvveti (çekmeceyi açıp uygulanan direnç farklı düzeylerde karşı çekmece çekmek için sarf) ölçüm sağlar. Çekmecenin arkasına bağlı bir rotatif elektromanyetik motora uygulanan akım yoğunluğu değişen farklı düzeylerde çekmecenin açılış karşı direnç elde edilmiştir. Set-up çekmecenin açılış yönüne paralel bir dirençli kuvvet uygulamak için tasarlanmıştır. Çekmece set-up detaylı şeması yazarın isteği üzerine kullanılabilir. Tüm bu veri arayüzü ile toplanır.nd yazılımı Spike 2 ve görüntülenen Şekil 7'de gösterilmiştir. , Daha önce reported1 4,15 olduğu gibi, bu görevleri servikal kord lezyon spontan iyileşme aksonal rejenerasyon (Şekil 8) teşvik etmeyi amaçlayan özel bir tedavi ile artabilir olup olmadığını araştırmak için davranışsal olarak temsil eder. Alma skoru ve temas süresi parametreleri el becerileri farklı bileşenleri yansıtır: birincisi tüm motor sırası (ulaşan, açgözlü, pelet elini ağzına, ulaşım çekme) ise ikinci bir odaklı sadece açgözlü faz. Bu iki parametre değiştirilmiş ve dönen Brinkman kurulu görevler için özellikle doğru ve tamamlayıcı niteliktedir. Skoru bu iki görev, büyük ölçüde gereksiz bilgi temsil Oysa, aksine temas süresi nedeniyle daha fazla görev özel bilgi sağlardönen Brinkman yönetim kurulu görev yuva pozisyonu değişkenliği, modifiye Brinkman yönetim kurulu görev statik konumuna göre. El hareketlerinin özgürlüğü derece kapalı alan ile sınırlı olarak Brinkman kutu görevi, iki yukarıda belirtilen görevleri farklıdır. Bunun bir sonucu olarak, Brinkman kutu içinde gemide farklı yuvalara pozisyonları kutusunun azlık nedeniyle elle kavrama gerçekleştirmek için zorluk açısından önemli bir rol oynamaktadır. Örneğin, kutunun sağ tarafında bulunan yuvaları elle kavrayarak sağ lateral duvarı ile karışır. Sonuç olarak, modifiye Brinkman kurulu olarak 30 saniye ile sınırlı erişim skoru değerlendirmesi, aslında başka bir oturumda, bu kısıtlı süre içinde önemli bir değişkenlik üreten maymun tarafından ziyaret yuva pozisyonuna bağlı olarak önyargılı olacaktır. Bu nedenle, bu invo için daha uygun olurlve tüm yuvaları (n = 20) ve bu nedenle parametre toplam süre seçildi. Modifiye Brinkman kurulu, toplam süre maymun olarak dikkate değildi çok sayıda yuva yapılması nedeniyle bazı durumda gevşek motivasyon (Örneğin sonrası lezyon) (n = 50). Eğer hayır ise, aynı hat boyunca temas süresi analizi, modifiye Brinkman kurulu sadece ilk beş yuva seçilen yuva pozisyonu olarak kabul edildi ise küçük (dikkate Brinkman kutusu tüm yuvaları almak için saklı. Bu parametre üzerinde etkisi). Bu nedenle, son derece yerinde ve bilgilendirici bir parametre olduğu gözlenmiştir olarak Brinkman kutusu için, en azından bizim çalışmalarda bir motor korteks lezyon (tabi maymunlar ile, toplam süre belirlemek için bir ilk yaklaşım tavsiye için herhangi bir veri omurilik) maymunlar Lezyonlu. Bununla birlikte, temas süresi Brinkman kutusu için kabul edilebilir, ancak yirmi yuvaları da dahil olmak üzere ikinci bir adım, ancak ayrı ayrıyatay ve dikey yuvası (gösterilmemiştir). Şekil 1, deney Genel şeması . Hayvan davranış laboratuvara sonra taşınan hayvan tesis, primat sandalye içine transfer edilir. Her bir günlük oturumunda, maymun, 1 test yapar. Alternatif günlerde, maymun, daha sonra test 2 gerçekleştirir ve / veya test 3 ve / veya test 4. Bazı maymunlar (özellikle motive), tüm testler aynı günlük oturum yapabilir. Gıda pelet (ödül olarak kullanılır), yaklaşık 4 mm çapında yuvarlak bir şekil sıkıştırılmış kurutulmuş muz ya da glikoz tozu yapılmıştır. Tüm davranış testleri, biz BioServ One 8. sokak, Suite, Frenchtown, NJ 08.825, ABD tarafından sağlanan tozsuz hassas pelet (45 mg) kullanın. Yuvaların boyutu 15 mm uzunluğunda, 8 mm wid ise modifiye Brinkman kurulu boyut, 240mm uzunluğunda ve 140 mm genişliğinde.derin e ve 6 mm. Rotatif Brinkman kurulu, yönetim kurulu çapı 114 mm. Şekil 2 Temsilcisi (cerrahi) servikal kord lezyonu (panel A; 15 değiştirilmiş) ve motor korteks (panel B 16 değiştirilmiş) (kimyasal) lezyon ilgili histolojik kesitlerde türetilmiş, SMI-32 boyanması için işlenmiş . Motor korteks lezyon boyutu ve konumu, beyin ve yeniden konumlandırılan ardışık frontal bölümlerden yeniden olmuştur, oysa servikal kord lezyonu, spinal kord arka arkaya sagital bölümler (panel A) maksimum ölçüde onarılmıştır ilgili beyin yarımkürede lateral görünümü (B panelinden kırmızı nokta). Servikal kord lezyonu, tek taraflı olarak ana CS yolu alçı kesintiye bir alt hemisection seviyesi C7-C8 bir ameliyat bıçağı ile transeksiyonu sonuçlandıel kasları kontrol 14,15,20 motor nöronlar üzerinde dorsolateral kordon isteksayısı. Kalıcı kortikal lezyon intrakortikal mikrostimülasyonla (ICMS, görmek 16,21,22) ile daha önce kurulan el temsili kapsayan siteleri, 13,16,17 ibotenic asit infüzyonu ile üretilmiştir . Kortikal lezyon topraklarında merkezi sulkus rostral banka (paneli B kesikli çizgi ile tasvir alan) nöron katmanları III ve V SMI-32 boyanma ani bir kesinti gibi görünür. Şekil 3, spinal kord (Şekil 2A gösterildiği gibi) bir lezyon tabi bir maymun tarafından yapılan modifiye Brinkman yönetim kurulu görev (test 1) elde edilen Temsilcisi verileri . Grafikte dikey yuvası (mavi semboller) ve yatay yuvası (kırmızı semboller) için ayrı ayrı puan (ordinat) gösterir. Sarı semboller toplamıverilen bir günlük oturumunda dikey ve yatay puanları. Apsis, zaman davranış oturumları gün boyunca. Dikey kesik redline (gün 0) lezyon gerçekleştirildiği gün. Üç farklı dönemlerde vurgulanır: İlki (siyah kesikli çizgi) plato lezyonun önce ikinci performans plato (mavi kesikli çizgi) ve üçüncü (yeşil kesik çizgi), eğitim dönemine karşılık gelir performans iyileşti. Veriler 15 ile değiştirilmiş. Şekil 4A Şekil 3 (test 1) gibi aynı, ama bir maymun motor korteks bir lezyon (Şekil 2B gösterildiği gibi) maruz. (Şekil 3 aynı sözleşmeler paneli A) ve temas süresi (BT paneli B) verileri grafikler puan. Apsis, zaman içindavranışsal oturumları gün üst üste. Dikey kesik redline (gün 0) lezyon gerçekleştirildiği gün. Panel B, her nokta, parmak ve bir yuva pelet (gri çubuk medyan değeri temsil eder, her oturum başına 5 çalışma için oryantasyon) arasındaki temas zamana tekabül eder. Hayvan lezyonun hemen sonra) görev (gerçekleştiremedi olan çalışmalar için, CT, doymuş bir değeri 5 saniye olarak göründüğüne dikkat edin. Veri 16,17 değiştirilmiş. Şekil 4B. Plato (Post) kurtarma faz (Recovery) ve post-lezyon sırasında, motor korteks (Ön) lezyonu önce, contralesional el ile yapılan modifiye Brinkman yönetim kurulu görev kabul edilen strateji analizi . Her yuvası renk, tek oturumda maymun (koyu mavi ve koyu kırmızı ile ziyaret son yuvası ziyaret eden ilk yuvası tasvir) tarafından ziyaret yuvası sırayla gösterir. Not that öncesi lezyon, maymun, tahtanın sol tarafında başlayan ve sağa doğru sistematik olarak taranır. Kurtarma sırasında, sırayla değişti. Plato-lezyon sonrası, stratejisini kabul etti öncesi lezyon yeniden ortaya çıktı (soldan sağa sistematik tarama). Şekil 5 Temsilcisi veri, görsel kontrol altında görev yapan bir maymun Brinkman kutusu (test 2) türetilmiştir. Koordine motor korteks (dikey kesikli çizgi) bir lezyon öncesi ve sonrası yapılan 20 kuyudan günlük seans boyunca (apsiste), boşaltmak için gereken toplam süre. Kutu içinde erişilebilir hacim ölçüleri, 1360 cm 3 (120mm * 110mm * 103mm) . Daha büyük bir değişkenlik, tek oturumda sonraki toplam süre ile karakterize bir eğitim başlangıç aşamasında, unutmayın. Kortikal lezyon hemen sonra,maymun (200 saniye veri noktaları doymuş) görevi gerçekleştirmek için mümkün değildi. P değeri (yatay gri dikdörtgenin sağ orta son seans öncesi lezyon (solda yatay gri dikdörtgenin orta), medyan toplam süresi ve medyan toplam süre sonrası lezyon arasındaki fark istatistiksel olarak anlamlı .) Motor korteks lezyon hacmi 41.8 mm 3 iken, fonksiyonel iyileşme yüzdesi% 89.6. Veriler 19 ile değiştirilmiş. Şekil 6 Şekil 4A (panel B) aynı sözleşmelere rotatif Brinkman (test 3) yönetim kurulu görev edilen lezyon öncesi ve sonrası lezyon ölçülen temas süresi resimde Temsilcisi sonuçları (üst iki grafik), motor korteks (veri değiştirilmiş 17) bir lezyona maruz kalan bir maymun . Üst grafik saat yönünde ("Cl") ro için. kurulu atılmasına yönelik çalışmalar, alt grafik, kurulu bir saat yönünün tersine ("C-Cl") dönüş için ise. Iki dikey gri oklarla maymun contralesional elle görevi gerçekleştirmek için mümkün olduğu gibi, temas süresi, lezyonun hemen sonra birkaç seans sonsuz uzun olduğunu göstermektedir. Rakamın altındaki resim dizi temas süresi (modifiye Brinkman kurulu ve dönen Brinkman kurulu için geçerli) ölçmek için yöntem göstermektedir. En soldaki resim pelet (pelet ve işaret parmağı arasında temas etmeden önce 100 ms) içeren yuvaya yaklaşan eli gösterir. Sağdaki sonraki çerçeve iletişim (0 ms) zaman noktasına karşılık gelir. Sonra temas süresi pelet yuvasından dışarı alındığı zaman noktasına karşılık gelen kare (en sağdaki tek) ulaşana kadar çalıştığı zaman aralığı (ms) olarak tanımlanır. Burada temas süresi 240 ms. 58/3258fig7.jpg "/> Şekil 7 ulaşmak ve kavramak çekmece görev (test 4) bir maymun tarafından yapılan bir oturumda elde edilen Temsilcisi verileri. Panel A: Ham verileri üç parametre karşılık gelen tek bir duruşma sırasında çevrimiçi olarak satın yük kuvveti kırmızı mavi, kavrama kuvveti ve yeşil çekmece yerinden. Birçok belirteçler görev sırasında elde edildi: toplama zamanı, zaman açgözlü ödül karşılık, çekmece ve topuzu touch (tch) hayvan ilk düğmeyi dokunur zaman noktasına tam olarak açılması için tam açık. Zaman hayvanın topuzu dokunma için kilitli) 1, 2) başlangıcı, kavrama kuvveti; analizi için, yedi imleçler kritik zaman noktada gözler önüne serilen görev (örneğin 3 alt üç yatay çizgiler gri imleçler) yerleştirildi 3) maksimal kavrama kuvveti; yük kuvvet 4) başlangıcı; 5) maksimal yük gücü; 6) çekmece tamamen açık olduğunda kilitlenmiştir; 7) toplama zamanı kilitledi. Panel B: Temsilciliği görevi sırasında kaydedilen iki parametre kavrama kuvveti (gücü parmağı ve başparmak arasında topuzu kavramak için kullanılır) ve iki şekil yük kuvveti (çekmece açmak için kullanılan kuvvet): kantitatif sonuçlar: maksimum değeri (solda grafik) ve eğim değeri (max başlangıcından sağ grafik). Burada gösterilen direnç beş farklı göreli seviyeleri dördü edilmiştir: R3 R0 (0 Newton), (1.4 N), R5, R7 (5 N) (2.75 N). Çekmecenin topuzu ve düz bir üçgen şekli vardır. Çekmeceyi bağlı üçgenin tabanı 20mm ölçülerinde ve üst (tabanından 15 mm), 7 mm çapında dairesel bir kontur oluşur. ; Genişlik = 27 mm ve yükseklik = 45mm uzunluk = 50 mm: çekmece kendisi şu boyutları vardır. <p class="Jove_content"> Şekil 8 davranış testi 1 kullanımının servikal kord lezyonu fonksiyonel iyileşme tedavinin olası etkisini araştırmak için (anti-Nogo-A antikoru) Hatırlatma (15 değiştirilmiş). (Maymun anti-Nogo-A antikoru tedavi grubuna göre daha az kırmızı semboller el becerisi kurtarır; hem puanları ve temas süresi, yanı sıra her iki yuvası yönelimleri kontrol antikor grubu (n = 6 mavi semboller) maymunlar tedavi n = 7), özellikle büyük hacimli lezyon. 2 grup ile anlamlı farklılık p = 0.035 (paneli), p = 0.022 (panel), p = 0.035 (panel C) ve p = 0.008 (panel D).