Triagem para Modificações Genômicas: Um Método para Identificar Mutantes Gerados por CRISPR em Drosophila
Published: April 30, 2023
Abstract
Fonte: Du, L., et al. Uma Estratégia Eficiente para Gerar Sistemas de Transcrição Binária específica de tecido em Drosophila por Edição de Genoma. J. Vis. Exp. (2018).
Este vídeo descreve um método de triagem para identificar moscas transgênicas de Drosophila, cujo genoma foi modificado usando CRISPR-Cas9. O CRISPR-Cas9 é uma poderosa ferramenta de edição de genomas que revolucionou a forma como os cientistas podem manipular o genoma de um organismo. No protocolo de exemplo, veremos como identificar mutantes gerados pelo CRISPR, nos quais uma inserção de uma sequência de transativação substitui o primeiro exon do gene sem ramificações (bnl),criando assim uma linha de driver específica de genes bnl, bnl-LexA.
Protocol
Este protocolo é um trecho de Du et al., Uma Estratégia Eficiente para Gerar Sistemas de Transcrição Binária específicos de tecido em Drosophila por Edição de Genoma, J. Vis. Exp. (2018). 1. Genética de moscas e triagem (Figura 1 e Figura 2) Quando os embriões injetados se desenvolvem em adultos, cruze cada G0 voa para balançar moscas. Selecione o balanceador adequado para o cromossomo contendo o alelo direcionado. Anestesiar…
Representative Results
Figura 1: Uma visão geral do fluxo de trabalho para a edição de genoma mediada pelo CRISPR/Cas9 para gerar um sistema de transcrição binária. A duração aproximada do tempo necessária para cada etapa é indicada. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura. <img alt="Figure 2" class="xfi…
Materials
| Tris-HCl | Sigma Aldrich | T3253 | Biologia Molecular |
| EDTA | Sigma Aldrich | E1161 | Biologia Molecular |
| NaCl | Sigma Aldrich | S7653 | Biologia Molecular |
| UltraPure DNase/RNase-Free Water | ThermoFisher Scientific | 10977-023 | Biologia Molecular |
| Primers | IDT-DNA | PCR | |
| Proteinase K | ThermoFisher Scientific | 25530049 | Biologia Molecular |
| 2x PCR PreMix, with dye (red) | Sydlab | MB067-EQ2R | Biologia Molecular |
| MKRS/TB6B | Kornberg lab | Fly line | |
| CO2 station | Genesee Scientific | 59-122WCU | fly pushing |
| Stereo microscope | Olympus | SZ-61 | fly pushing |
| Microtube homogenizing pestles | Fisher-Scientific | 03-421-217 | genomic DNA isolation |
Citar este artigo
Screening for Genomic Modifications: A Method to Identify CRISPR-Generated Mutants in Drosophila. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20110, doi: (2023).