臭気物質の嗅覚ニューロンの電気生理学的応答は、単一感覚子記録を使って昆虫で測定することができます。このビデオの記事では、ショウジョウバエの触角の単一感覚子記録を実行する方法を紹介します(<em>キイロショウジョウバエ</em>)とマラリアの蚊(の上顎palps<em>ハマダラカ</em>)。
嗅覚は、食品、仲間、捕食者、および産卵部位3を見つけるために昆虫のために不可欠です。昆虫嗅覚神経細胞は(OSNs)嗅覚器官の表面を覆う感覚器と呼ばれる感覚毛、で囲まれています。各感覚子の表面は、経由する付臭剤が通過すると、特定の感覚子に収容OSNsの感覚樹状突起をbathes感覚子リンパと呼ばれる液体に溶解、小さな孔で覆われている。 OSNの樹状突起は、その昆虫の機能の臭気依存性イオンチャネル4、5として、嗅覚受容体(OR)タンパク質を発現。論理和のいずれかが増大したり、OSNの基礎発火率を減少させると匂い物質の相互作用。活動電位の形でこのニューロン活動は、品質、強度、そして匂い6,7の時間特性の最初の表現を体現しています。
これらの感覚毛への容易なアクセスを考えると、それは、参照電極は、昆虫の目や身体のリンパ節に置かれている間、感覚子リンパに記録電極を導入することにより、単一OSNsから細胞外記録を行うことが可能である。一から四OSNs間ショウジョウバエ 、感覚器家の中で、しかしそれぞれのOSNは、通常、特徴的なスパイクの振幅が表示されます。スパイクソーティングの技術は個々のOSNsにスパイク応答を割り当てることが可能となります。この単一感覚子記録(SSR)技術は、感覚子リンパとOSNs 1、2、8の受容体活性によって生成される電気的なスパイクのような参照電極間の電位差を監視します。匂い物質に対する応答のスパイク数の変化は、昆虫でコーディング匂いの細胞学的根拠を示している。ここで、我々は現在、 キイロショウジョウバエやハマダラカにSSRを実行するために私たちのラボで使用される調製法を説明し、感覚子特異的に着臭剤により誘導される代表的なトレースを示しています。
嗅覚手がかりは、食料源、潜在的な仲間、そして捕食者を識別するために、生物によって使用されます。嗅覚ニューロン(OSNsは)外部からの刺激や情報が処理される脳の高次中枢との間の最初のリレーの中心です。 キイロショウジョウバエやハマダラカでは、OSNsは簡単にアクセス可能であり、臭気のパフで刺激しながら、その電気的活動をモニターすることができます。
<p…Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
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Paraffin oil | Odors | Fluka | 76235 | |
High purity odors (>98%) | Odors | Sigma-Aldrich | Methyl acetate #296996 1-octen-3-ol #74950 |
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Filter paper strips | Odors | Fisherbrand | 05-714-1 | Chromatography paper |
Connectors | Odors | Cole-Parmer | EW-06365-40 | 1/16×1/8″ |
Glass vials | Odors | Agilent Technologies | 5182-0556 | |
Air line plastic tubing | Odor Delivery | Python Products | 500PAL | |
1 serological pipette | Odor Delivery | Corning | 4101 | 10 mL |
Plastic tubing | Odor Delivery | Cole-Parmer | EW-06418-0 | 0.050″x0.090″OD |
Disposable borosilicate glass Pasteur pipettes | Odor Delivery | FisherBrand | 13-678-20A | 5-3/4 inches |
Programmable stimulus controller | Odor Delivery | Syntech | CS-55 | |
Anti-vibration table | Electrophysiology Equipment | TMC | 63533 | 36”Wx30”Dx29”H |
Faraday cage | Electrophysiology Equipment | TMC | MI8133303 | |
Inverted microscope | Electrophysiology Equipment | Nikon | E600FN ECLIPSE | Recording microscope |
10x and 100x objectives | Electrophysiology Equipment | Nikon | 10x Plan Fluor 100x L Plan | |
Dissecting microscope | Electrophysiology Equipment | Nikon | EZ645 | electrode sharpening/insect prep microscope |
Magnetic stands | Electrophysiology Equipment | Newport | MODEL 150 | |
IDAC | Electrophysiology Equipment | Syntech | IDAC-4 | |
Acquisition software | Electrophysiology Equipment | Syntech | Autospike | |
1 macromanipulator | Electrophysiology Equipment | NARISHIGE | MN-151 | Joystick manipulator Used for positioning reference electrode |
1 micromanipulator | Electrophysiology Equipment | EXFO | PCS-6000 | Used for positioning recording electrode |
Crocodile clip | Electrophysiology Equipment | Pomona | AL-B-12-0 | |
Electric cable | Electrophysiology Equipment | Pomona | B-36-0 | Test Cable Assembly |
2 electrode holders | Electrophysiology Equipment | Syntech | N/A | Electrode holders (set of 2) for tungsten wire electrode |
AC probe | Electrophysiology Equipment | Syntech | N/A | Universal single ended probe (10xAC) |
Tungsten electrodes | Electrophysiology Equipment | Microprobes | M210 | straight tungsten rods, 0.005“x3“ |
Potassium hydroxide | Electrophysiology Equipment | Sigma-Aldrich | 221473 | |
Syringe | Electrophysiology Equipment | BD | 301625 | 20 mL |
Power supply | Electrophysiology Equipment | WILD HEERBRUGG 6V 40W | e.g MTR32 | |
Vertical puller | Insect prep | Narishige | PB-7 | |
Razor blade | Insect prep | VWR | 55411-050 | |
Dental wax | Insect prep | Patterson | 091-1503 | |
Microscope slide | Insect prep | FisherBrand | 12-550A | |
Cover glass | Insect prep | FisherBrand | 12-541A | 18X18 #1.5 |
Polypropylene mesh | Insect prep | Small Parts inc. | CMP-0500-B | |
Glass electrode | Insect prep | Frederick Haer & Co. | 27-32-0-075 | Capillary tubing borosilicate 1.5mm OD x 1.12mm ID x 75 mm |
Double-sided tape (3M) | Insect prep | 3M | MMM6652P3436 | Double-sided tape (3M) |
Forceps | Insect prep | Fine Science Tools | 021×0053 | Dumont #5 Mirror Finish Forceps |
Small plastic cup | Insect prep | VWR | 89009-662 | 7 x 5.7 (23/4 x 21/4) |
Electric aspirator | Insect prep | Gempler’s | RHM200 |