Las respuestas electrofisiológicas de las neuronas sensoriales olfativas a los olores pueden ser medidos en los insectos a partir de grabaciones individuales sensillum. En este artículo de vídeo vamos a demostrar cómo realizar grabaciones individuales sensillum en las antenas de la mosca del vinagre (<em> Drosophila melanogaster</em>) Y los palpos maxilares del mosquito de la malaria (<em> Anopheles gambiae</em>).
El sentido del olfato es esencial para los insectos para encontrar los alimentos, los compañeros, los depredadores, y tres sitios de oviposición. Insectos neuronas olfativas sensoriales (OSN) se incluyen en pelos sensoriales llamados sensilla, que cubren la superficie de los órganos olfativos. La superficie de cada sensillum está cubierta de pequeños poros, a través del cual pasan los odorantes y se disuelven en un líquido llamado linfa sensillum, que baña las dendritas sensorial de la OSN ubicado en un sensillum dado. Las dendritas OSN expresa odorante del receptor (OR) de las proteínas, que en función de los insectos como los canales iónicos olor-4, 5. La interacción de las sustancias odoríferas con RUP, aumenta o disminuye la frecuencia de disparo basal de la OSN. Esta actividad neuronal en forma de potenciales de acción representa la primera representación de la calidad, la intensidad y características temporales de la sustancia odorífera 6, 7.
Teniendo en cuenta el fácil acceso a estos pelos sensoriales, es posible realizar grabaciones extracelulares de OSN solo por la introducción de un electrodo de registro en la linfa sensillum, mientras que el electrodo de referencia se sitúa en los ganglios linfáticos del ojo o del cuerpo del insecto. En Drosophila, sensilla casa entre una y cuatro OSN, pero cada OSN suele mostrar una característica de amplitud pico. Técnicas de clasificación de Spike permiten asignar las respuestas a clavar OSN individual. Este registro único sensillum (SSR) técnica monitorea la diferencia de potencial entre la linfa sensillum y el electrodo de referencia como los picos eléctricos que se generan por la actividad de los receptores de OSN 1, 2, 8. Los cambios en el número de picos en la respuesta al olor representan las bases celulares de la codificación de olores en los insectos. Aquí se describe el método de preparación se utilizan actualmente en nuestro laboratorio para llevar a cabo en la República Socialista Soviética de Drosophila melanogaster y el Anopheles gambiae, y mostrar las huellas representante inducida por los odorantes de una manera sensillum específicos.
Señales olfativas son utilizadas por los organismos para identificar las fuentes de alimentos, posibles parejas, y los depredadores. Las neuronas sensoriales olfativas (OSN) es el centro de primer relevo entre los estímulos externos y los centros superiores del cerebro donde se ve la información procesada. En Drosophila melanogaster y el Anopheles gambiae, OSN son fácilmente accesibles y su actividad eléctrica se puede monitorizar mientras estimulado por bocanadas de olor.
<p class="jove_conte…Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
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Paraffin oil | Odors | Fluka | 76235 | |
High purity odors (>98%) | Odors | Sigma-Aldrich | Methyl acetate #296996 1-octen-3-ol #74950 |
|
Filter paper strips | Odors | Fisherbrand | 05-714-1 | Chromatography paper |
Connectors | Odors | Cole-Parmer | EW-06365-40 | 1/16×1/8″ |
Glass vials | Odors | Agilent Technologies | 5182-0556 | |
Air line plastic tubing | Odor Delivery | Python Products | 500PAL | |
1 serological pipette | Odor Delivery | Corning | 4101 | 10 mL |
Plastic tubing | Odor Delivery | Cole-Parmer | EW-06418-0 | 0.050″x0.090″OD |
Disposable borosilicate glass Pasteur pipettes | Odor Delivery | FisherBrand | 13-678-20A | 5-3/4 inches |
Programmable stimulus controller | Odor Delivery | Syntech | CS-55 | |
Anti-vibration table | Electrophysiology Equipment | TMC | 63533 | 36”Wx30”Dx29”H |
Faraday cage | Electrophysiology Equipment | TMC | MI8133303 | |
Inverted microscope | Electrophysiology Equipment | Nikon | E600FN ECLIPSE | Recording microscope |
10x and 100x objectives | Electrophysiology Equipment | Nikon | 10x Plan Fluor 100x L Plan | |
Dissecting microscope | Electrophysiology Equipment | Nikon | EZ645 | electrode sharpening/insect prep microscope |
Magnetic stands | Electrophysiology Equipment | Newport | MODEL 150 | |
IDAC | Electrophysiology Equipment | Syntech | IDAC-4 | |
Acquisition software | Electrophysiology Equipment | Syntech | Autospike | |
1 macromanipulator | Electrophysiology Equipment | NARISHIGE | MN-151 | Joystick manipulator Used for positioning reference electrode |
1 micromanipulator | Electrophysiology Equipment | EXFO | PCS-6000 | Used for positioning recording electrode |
Crocodile clip | Electrophysiology Equipment | Pomona | AL-B-12-0 | |
Electric cable | Electrophysiology Equipment | Pomona | B-36-0 | Test Cable Assembly |
2 electrode holders | Electrophysiology Equipment | Syntech | N/A | Electrode holders (set of 2) for tungsten wire electrode |
AC probe | Electrophysiology Equipment | Syntech | N/A | Universal single ended probe (10xAC) |
Tungsten electrodes | Electrophysiology Equipment | Microprobes | M210 | straight tungsten rods, 0.005“x3“ |
Potassium hydroxide | Electrophysiology Equipment | Sigma-Aldrich | 221473 | |
Syringe | Electrophysiology Equipment | BD | 301625 | 20 mL |
Power supply | Electrophysiology Equipment | WILD HEERBRUGG 6V 40W | e.g MTR32 | |
Vertical puller | Insect prep | Narishige | PB-7 | |
Razor blade | Insect prep | VWR | 55411-050 | |
Dental wax | Insect prep | Patterson | 091-1503 | |
Microscope slide | Insect prep | FisherBrand | 12-550A | |
Cover glass | Insect prep | FisherBrand | 12-541A | 18X18 #1.5 |
Polypropylene mesh | Insect prep | Small Parts inc. | CMP-0500-B | |
Glass electrode | Insect prep | Frederick Haer & Co. | 27-32-0-075 | Capillary tubing borosilicate 1.5mm OD x 1.12mm ID x 75 mm |
Double-sided tape (3M) | Insect prep | 3M | MMM6652P3436 | Double-sided tape (3M) |
Forceps | Insect prep | Fine Science Tools | 021×0053 | Dumont #5 Mirror Finish Forceps |
Small plastic cup | Insect prep | VWR | 89009-662 | 7 x 5.7 (23/4 x 21/4) |
Electric aspirator | Insect prep | Gempler’s | RHM200 |