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양성 RNA 바이러스 변이체를 엔지니어링하기 위한 역유전학
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JoVE 신문 유전학
Reverse Genetics to Engineer Positive-Sense RNA Virus Variants
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양성 RNA 바이러스 변이체를 엔지니어링하기 위한 역유전학

DOI:
10.3791/63685-v

•

15:49 min

•

June 09, 2022

•

, , ,
1Virology Section, Department of Life Sciences,Shiv Nadar University, 2Gastroenterology,Sanjay Gandhi Postgraduate Institute of Medical Sciences

Chapters

  • 00:04Introduction
  • 01:01Genome‐Wide Substitution Mutagenesis of JFH1 Using Error‐Prone PCR
  • 02:46Estimation of the Proportion of Mutations in ep‐PCR Products (Mutant Libraries)
  • 06:08Viral RNA Transfection of the Huh7.5 Cell Line
  • 07:57Quantification of Virus Titers
  • 11:59Drug‐Resistant Viral Variant Selection
  • 13:33Results: Integration of ep‐PCR and Virus Reverse Genetics to Generate HCV Mutants
  • 15:17Conclusion

Summary

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이 프로토콜은 오류가 발생하기 쉬운 PCR과 역유전학을 사용하여 전장 돌연변이 RNA 합성을 결합하여 C형 간염 바이러스 게놈에 제어 가능한 유전적 다양성을 도입하는 방법을 설명합니다. 이 방법은 표현형 선택을 위한 모델을 제공하며 10kb 길이의 양성 감지 RNA 바이러스 게놈에 사용할 수 있습니다.

Tags

Reverse GeneticsPositive-sense RNA VirusViral GenomeMutagenesisRNA LibraryPhenotype SelectionCloning-freeEp-PCRIn Vitro RNA SynthesisCDNA SynthesisAmplificationA Overhang Addition

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