JoVE 비디오를 활용하시려면 도서관을 통한 기관 구독이 필요합니다. 전체 비디오를 보시려면 로그인하거나 무료 트라이얼을 시작하세요.
Utvärdering av substrat Ubiquitylation av E3 Ubiquitin-ligas i däggdjurscelllysater
Chapters
- 00:05Introduction
- 01:08Cell Culture
- 02:33Cell Transfection
- 03:41Cell Lysis and Immunoprecipitation
- 07:40Results: Specific Polyubiquitylation of UXT-V2-HA Mediated by Fbxo7
- 09:06Conclusion
Vi tillhandahåller ett detaljerat protokoll för en ubiquitylationsanalys av ett specifikt substrat och en E3 ubiquitin-ligas i däggdjursceller. HEK293T-cellinjer användes för proteinöveruttryck, det polyubiquitylerade substratet renades från celllysater genom immunoprecipitation och löstes i SDS-PAGE. Immunoblotting användes för att visualisera denna post-translationella modifiering.
Tags
Keyword Extraction:Substrate UbiquitylationE3 LigaseMammalian Cell LysatesImmunoprecipitation AssayWestern BlotHuman DiseasesCancerNeurological DisordersE3 Ligase DysregulationHEK293T Cell LineDulbecco’s Modified Eagles MediumFetal Bovine SerumPenicillinStreptomycinL-glutamineTrypsin EDTAPolyethyleneimineOpti-MEM 1 Reduced Serum MediumTransient Transfections
