JoVE 비디오를 활용하시려면 도서관을 통한 기관 구독이 필요합니다. 전체 비디오를 보시려면 로그인하거나 무료 트라이얼을 시작하세요.
Оценка убиквитилирования субстрата убиквитин-лигазой E3 в лизатах клеток млекопитающих
2,191 Views
•
09:47 min
•
May 10, 2022
DOI:
Summary
Automatically generated
Мы предоставляем подробный протокол для анализа убиквитилирования конкретного субстрата и убиквитин-лигазы E3 в клетках млекопитающих. Клеточные линии HEK293T использовали для гиперэкспрессии белка, полиубиквитилированный субстрат очищали от клеточных лизатов иммунопреципитацией и разрешали в SDS-PAGE. Иммуноблоттинг использовался для визуализации этой посттрансляционной модификации.
Explore More Videos
Keyword Extraction:Substrate UbiquitylationE3 LigaseMammalian Cell LysatesImmunoprecipitation AssayWestern BlotHuman DiseasesCancerNeurological DisordersE3 Ligase DysregulationHEK293T Cell LineDulbecco’s Modified Eagles MediumFetal Bovine SerumPenicillinStreptomycinL-glutamineTrypsin EDTAPolyethyleneimineOpti-MEM 1 Reduced Serum MediumTransient Transfections
Read Article
Cite this Article
dos Passos, P. M. S., Spagnol, V., de Correia, C. R., Teixeira, F. R. Evaluation of Substrate Ubiquitylation by E3 Ubiquitin-ligase in Mammalian Cell Lysates. J. Vis. Exp. (183), e63561, doi:10.3791/63561 (2022).
Copy