Journal
/
생화학
/
Evaluatie van substraatubiquitylering door E3 Ubiquitine-ligase in zoogdiercellysaten
JoVE 신문
생화학
JoVE 비디오를 활용하시려면 도서관을 통한 기관 구독이 필요합니다.  전체 비디오를 보시려면 로그인하거나 무료 트라이얼을 시작하세요.
JoVE 신문 생화학
Evaluation of Substrate Ubiquitylation by E3 Ubiquitin-ligase in Mammalian Cell Lysates
Please note that all translations are automatically generated. Click here for the English version.

Evaluatie van substraatubiquitylering door E3 Ubiquitine-ligase in zoogdiercellysaten

DOI:
10.3791/63561-v

•

09:47 min

•

May 10, 2022

•

, , ,
1Department of Genetic and Evolution,Federal University of São Carlos, 2Department of Biochemistry and Immunology, Faculty of Medicine of Ribeirão Preto,University of São Paulo

Chapters

  • 00:05Introduction
  • 01:08Cell Culture
  • 02:33Cell Transfection
  • 03:41Cell Lysis and Immunoprecipitation
  • 07:40Results: Specific Polyubiquitylation of UXT-V2-HA Mediated by Fbxo7
  • 09:06Conclusion

Summary

자동 번역

자동 번역

We bieden een gedetailleerd protocol voor een alomtegenwoordyleringstest van een specifiek substraat en een E3-ubiquitine-ligase in zoogdiercellen. HEK293T-cellijnen werden gebruikt voor eiwitoverexpressie, het polyubiquityleerde substraat werd gezuiverd uit cellysaten door immunoprecipitatie en opgelost in SDS-PAGE. Immunoblotting werd gebruikt om deze posttranslationele modificatie te visualiseren.

Tags

Keyword Extraction:Substrate UbiquitylationE3 LigaseMammalian Cell LysatesImmunoprecipitation AssayWestern BlotHuman DiseasesCancerNeurological DisordersE3 Ligase DysregulationHEK293T Cell LineDulbecco’s Modified Eagles MediumFetal Bovine SerumPenicillinStreptomycinL-glutamineTrypsin EDTAPolyethyleneimineOpti-MEM 1 Reduced Serum MediumTransient Transfections

Article

Embed

플레이리스트에 추가

Usage Statistics

Related Videos

Het definiëren van de ondergrond hebben voor lipase en fosfolipase Kandidaten

Menselijke perifere bloed neutrofiele isolatie voor het ondervragen van de Parkinson Geassocieerde LRRK2 Kinase Pathway door de beoordeling van Rab10 fosforylatie

Real-time opvolgen van de DNA Strand Exchange reactie gemedieerd door Rad51

Bestuderen van RNA Interactors van proteïne Kinase RNA-geactiveerd tijdens de zoogdieren celcyclus

Een strategie om verbindingen te identificeren die van invloed zijn op de celgroei en overleving in gekweekte zoogdiercellen bij een lage tot matige doorvoer

Atomaire absorptiespectroscopie om intracellulaire zink zwembaden in zoogdiercellen te meten

Interacties met en membraan Permeabilization van de mitochondriën van de hersenen door amyloid fibrils

Functionele karakterisatie van RING-type E3 Ubiquitin ligases in vitro en in planta

Analyse van neutrale lipidesynthese in Saccharomyces cerevisiae door metabole etikettering en dunne laagchromatografie

Dichtheidsgradiënt Ultracentrifugatie voor onderzoek naar endocytische recycling in zoogdiercellen

Read Article