हम स्तनधारी कोशिकाओं में एक विशिष्ट सब्सट्रेट और एक ई 3 सर्वव्यापी-लिगेज के सर्वव्यापी परख के लिए एक विस्तृत प्रोटोकॉल प्रदान करते हैं। एचईके 293 टी सेल लाइनों का उपयोग प्रोटीन ओवरएक्सप्रेशन के लिए किया गया था, पॉलीयूबिक्युइटिलेटेड सब्सट्रेट को इम्यूनोप्रेसिपिटेशन द्वारा सेल लाइसेट्स से शुद्ध किया गया था, और एसडीएस-पेज में हल किया गया था। इम्यूनोब्लॉटिंग का उपयोग इस पोस्ट-ट्रांसलेशनल संशोधन की कल्पना करने के लिए किया गया था।