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使用DNA纤维测定检测人细胞中复制后间隙的积累和修复
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Detection of Post-Replicative Gaps Accumulation and Repair in Human Cells Using the DNA Fiber Assay
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使用DNA纤维测定检测人细胞中复制后间隙的积累和修复
DOI:
10.3791/63448-v
•
10:32 min
•
February 03, 2022
•
Davi J. Martins*
1
,
Stephanie Tirman*
2
,
Annabel Quinet
,
Carlos F. M. Menck
1
Department of Microbiology, Institute of Biomedical Sciences
,
University of São Paulo
,
2
Division of Oncology, Department of Internal Medicine
,
Washington University in St. Louis
Chapters
00:04
Introduction
01:27
S1 Fiber Experimental Setup
03:51
DNA Fiber Preparation by Spreading
04:58
Immunostaining of DNA Fibers
06:45
Image Acquisition and Analysis
08:39
Results: Post-Replicative ssDNA Gaps on Ongoing Forks by S1 Fiber Assay and Post-Replicative Repair by Gap Filling
09:42
Conclusion
Summary
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在这里,我们描述了DNA纤维测定的两种修饰,以研究病变诱导后复制DNA的单链DNA间隙。S1纤维测定能够使用ssDNA特异性S1内切酶检测复制后间隙,而间隙填充测定允许间隙修复的可视化和定量。
Tags
DNA Fiber Assay
Post-replicative Gaps
S1 Nuclease
DNA Repair
Replication Stress
Genome Integrity
UV-C Irradiation
CldU Incorporation
CSK Permeabilization
DNA Lesion Detection
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