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CD95死誘導シグナル複合体の組成とプロスパスパーゼ-8の処理の測定
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JoVE 신문 생화학
Measuring Composition of CD95 Death-Inducing Signaling Complex and Processing of Procaspase-8 in this Complex
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CD95死誘導シグナル複合体の組成とプロスパスパーゼ-8の処理の測定

DOI:
10.3791/62842-v

•

07:17 min

•

August 02, 2021

•

,
1Translational Inflammation Research, Center of Dynamic Systems,Otto von Guericke University Magdeburg

Chapters

  • 00:05Introduction
  • 00:44Preparing Cells and CD95L Stimulation
  • 01:11Cell Harvest and Lysis
  • 02:29Immunoprecipitation
  • 03:28Western Blot
  • 04:21Western Blot Detection
  • 05:05Analysis of CD95 DISC Formation in HeLa-CD95 cells, c-FLIPL-overexpressing HeLa-CD95 cells, and Primary T Cells
  • 06:25Conclusion

Summary

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ここでは、死誘導シグナル伝達複合体(DISC)で直接カスパーゼ-8処理を検出し、この複合体の組成を決定する実験的ワークフローを提示する。この方法論は、細胞死経路の分子機構の解明からアポトーシスネットワークの動的モデリングまで幅広い応用を有する。

Tags

CD95DISCApoptosisCaspase-8ImmunoprecipitationCell LysisProtein Concentration

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