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遺伝子組み換えアノフェリン蚊集団におけるインデル変異を検出するデジタル液滴PCR
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Digital-Droplet PCR to Detect Indels Mutations in Genetically Modified Anopheline Mosquito Populations
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遺伝子組み換えアノフェリン蚊集団におけるインデル変異を検出するデジタル液滴PCR

DOI:
10.3791/62607-v

•

05:51 min

•

June 28, 2021

•

, , , ,
1Department of Microbiology & Molecular Genetics,University of California, Irvine, 2Department of Molecular Biology & Biochemistry,University of California, Irvine

Chapters

  • 00:04Introduction
  • 00:48PCR Preparation and Droplet Generation
  • 02:18PCR
  • 03:03Droplet Reading
  • 03:31Analysis
  • 04:49Results: Implications of ddPCR for NHEJ Identification and Quantification in Transgenic Anopheline Mosquitoes
  • 05:27Conclusion

Summary

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このプロトコルは、gRNA誘導Cas9切断およびDNA修復後の標的部位における非相同性端結合(NHEJ)事象の同定および定量化に関する分析を含む、DNA抽出からデジタル液滴PCR(ddPCR)の実験的セットアップまでのステップを提供する。この方法の他の用途としては、多型検出や遺伝子編集バリアント検証などの用途が挙げられる。

Tags

Digital Droplet PCRDdPCRNHEJ AnalysisIndel MutationsGene-edited MosquitoGenetic VariationHigh ThroughputFast TurnaroundField AnalysisGenetically Modified Organisms

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