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Quantitative RT-PCR mit hohem Durchsatz in Einzel- und Bulk-C. elegans Proben mit Nanofluidic-Technologie
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High-Throughput Quantitative RT-PCR in Single and Bulk C. elegans Samples Using Nanofluidic Technology
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Quantitative RT-PCR mit hohem Durchsatz in Einzel- und Bulk-C. elegans Proben mit Nanofluidic-Technologie

DOI:
10.3791/61132-v

•

08:19 min

•

May 28, 2020

•

, , , , , , ,
1Babraham Institute, 2Gurdon Institute,University of Cambridge, 3Department of Genetics,University of Cambridge, 4Wellcome Trust Genome Campus,Wellcome Trust Sanger Institute, 5Laboratory of Virology and Infectious Disease,The Rockefeller University

Chapters

  • 00:05Introduction
  • 00:46Worm-to-CT Worm Lysis
  • 02:08Reverse Transcription (RT) for Bulk Samples
  • 02:38Target Specific Preamplification
  • 03:19Exonuclease I Treatment
  • 03:53Sample Mix Preparation
  • 04:48Nanofluidic Chip Priming and Loading
  • 06:00Results: Representative Worm-to-CT Analysis
  • 07:45Conclusion

Summary

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In diesem Artikel wird ein Hochdurchsatzprotokoll zur schnellen und zuverlässigen Bestimmung der Genexpressionsniveaus in einzelnen oder massenhaften C. elegans Proben beschrieben. Dieses Protokoll erfordert keine RNA-Isolierung und erzeugt cDNA direkt aus Proben. Es kann zusammen mit hochdurchsatzigen multiplexed nanofluidischen Echtzeit-qPCR-Plattformen verwendet werden.

Tags

RT-qPCRC. ElegansNanofluidic TechnologyHigh-throughputSingle-sampleBulk-sampleRNA IsolationLysis BufferReverse TranscriptionPre-amplificationGene ExpressionInterindividual Variability

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