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Monitoraggio delle dinamiche di interazione proteina-RNA in vivo ad alta risoluzione temporale utilizzando χCRAC
JoVE 신문
생화학
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JoVE 신문 생화학
Monitoring Protein-RNA Interaction Dynamics In Vivo at High Temporal Resolution Using χCRAC
DOI:

09:15 min

May 09, 2020

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Chapters

  • 00:04Introduction
  • 00:58UV Crosslinking and Lysate Production
  • 03:18Elution and SDS-PAGE
  • 05:24PCR and Gel Extraction
  • 07:06Results: Temporal Binding of Nrd1 to its Targets
  • 08:47Conclusion

Summary

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Il cross-linking cinetico e l'analisi del cDNA è un metodo che consente di studiare la dinamica delle interazioni proteina-RNA nelle cellule viventi ad alta risoluzione temporale. Qui il protocollo è descritto in dettaglio, compresa la crescita delle cellule di lievito, la reticolazione UV, la raccolta, la purificazione delle proteine e le fasi di preparazione della libreria di sequenziamento di prossima generazione.

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