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Monitorando a Dinâmica da Interação Proteína-RNA In Vivo em Alta Resolução Temporal Usando χCRAC
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JoVE 신문 생화학
Monitoring Protein-RNA Interaction Dynamics In Vivo at High Temporal Resolution Using χCRAC

Monitorando a Dinâmica da Interação Proteína-RNA In Vivo em Alta Resolução Temporal Usando χCRAC

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•

09:15 min

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May 09, 2020

DOI:

10.3791/61027-v

DOI:
10.3791/61027-v

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09:15 min
May 09, 2020

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1Centre for Engineering Biology,University of Edinburgh, 2Institute of Cell Biology,University of Edinburgh, 3Department of Molecular Biology and Genetics,Aarhus University, 4UVO3 Ltd.

Summary

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A reticulação cinética e análise de cDNA é um método que permite investigar a dinâmica das interações proteína-RNA em células vivas em alta resolução temporal. Aqui, o protocolo é descrito em detalhes, incluindo o crescimento de células de levedura, reticulação UV, colheita, purificação de proteínas e etapas de preparação da biblioteca de sequenciamento de próxima geração.

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Protein-RNA InteractionKinetic CRACUV CrosslinkingRNA Binding ProteinsRNA ExtractionCell HarvestingTime-resolved AnalysisLive Cell MonitoringStress ResponseAdherent CellsMicroorganisms

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McKellar, S. W., Ivanova, I., van Nues, R. W., Cordiner, R. A., Chauhan, M., Christopoulou, N., Worboys, W., Langford, A., Jensen, T. H., Granneman, S. Monitoring Protein-RNA Interaction Dynamics In Vivo at High Temporal Resolution Using χCRAC. J. Vis. Exp. (159), e61027, doi:10.3791/61027 (2020).

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