En este artículo, describimos, en detalle, un protocolo para la generación de cultivos de la neurosfera a partir de células madre neurales de ratón postnatal derivadas de los principales nichos neurogénicos del ratón. Las neuroesferas se utilizan para identificar las células madre neurales del tejido cerebral permitiendo la estimación de los números de células precursoras. Además, estas estructuras 3D se pueden placar en condiciones diferenciativas, dando lugar a neuronas, oligodendrocitos y astrocitos, permitiendo el estudio del destino celular.