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ラパマイシン/mTOR相互作用を研究するための半定量薬物アフィニティ応答性標的安定性(DARTS)アッセイ

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JoVE 신문 생화학

A Semi-Quantitative Drug Affinity Responsive Target Stability (DARTS) assay for studying Rapamycin/mTOR interaction

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ラパマイシン/mTOR相互作用を研究するための半定量薬物アフィニティ応答性標的安定性(DARTS)アッセイ

DOI:

10.3791/59656-v

•

00:05 min

•

August 27, 2019

•

Chen Zhang*¹, Min Cui*¹, Yazhou Cui, Aubryanna Hettinghouse, Chuan-ju Liu²

¹Department of Orthopaedic Surgery,New York University Medical Center, ²Department of Cell Biology,New York University School of Medicine

Chapters

00:04Title
00:47Collect and Lyse Cells
01:59Incubate Protein Lysates with the Small Molecule and Perform Proteolysis
03:28Western Blot Analysis
03:59Results: Rapamycin Inhibition
05:03Conclusion

Summary

자동 번역

本研究では、タンパク質安定性の変化をモニタリングし、タンパク質リガンド相互作用の親和性を推定することにより、DARTS実験のデータ解析能力を強化した。相互作用は、プロテオティック曲線と線量依存曲線の 2 つの曲線にプロットできます。例示的なケースとしてmTOR-ラパマイシン相互作用を用いてきた。

Tags

DARTS Drug Affinity Responsive Target Stability MTOR Rapamycin Protein-ligand Interaction Proteolytic Curve Dose-dependence Curve 293T Cells Cell Lysis BCA Assay Pronase Protease Inhibitor Cocktail SDS-PAGE

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