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Einsatz von rekombinanten Fusionsproteinen in eine fluoreszierende Protease-Assay-Plattform und ihre In-Gel-Renaturierung
JoVE 신문
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JoVE 신문 생화학
Use of Recombinant Fusion Proteins in a Fluorescent Protease Assay Platform and Their In-gel Renaturation
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Einsatz von rekombinanten Fusionsproteinen in eine fluoreszierende Protease-Assay-Plattform und ihre In-Gel-Renaturierung

DOI:
10.3791/58824-v

•

19:23 min

•

January 16, 2019

•

, , , ,
1Department of Biochemistry and Molecular Biology, Faculty of Medicine,University of Debrecen, 2Biotechnology Research Department,Gedeon Richter Plc

Chapters

  • 00:00Title
  • 01:05Generation of the Substrate-coding Expression Plasmids
  • 02:16Expression of the Fluorescent Substrates
  • 03:35Cell Disruption
  • 04:26Ni-NTA Magnetic Agarose Bead-based Protease Assay
  • 12:39PAGE Analysis
  • 14:41Representative Results
  • 18:29Conclusion

Summary

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Hier präsentieren wir Ihnen die Einzelheiten des Verfahrens einer neu entwickelten Protease Assays Plattform nutzen N-terminalen Hexahistidine/Maltose-bindendes Protein und fluoreszierende Protein fusioniert rekombinante Substrate an der Oberfläche der Nickel-Nitrilotriacetic befestigt saure magnetische Agarose Korne. Eine anschließende Gelanalyse der Assay-Proben durch Natrium-Dodecyl-Sulfat-Polyacrylamid-Gelelektrophorese getrennt wird ebenfalls dargestellt.

Tags

Recombinant Fusion ProteinsFluorescent Protease AssayIn-gel RenaturationHIV-1 ProteaseHigh-throughput ScreeningFluorescence-based AssayProtein ExpressionCleavage SiteBL21(DE3) CellsPlasmid Construction

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