Caffeine Extraction, Enzymatic Activity and Gene Expression of Caffeine Synthase from Plant Cell Suspensions

00:04Title
00:28Caffeine Extraction in Cell Suspension of C. arabica L.
00:55Conditions for the Assessment of Caffeine by Thin Layer Chromatography (TLC) Denistometry
01:29Ribonucleic Acid (RNA) Isolation
02:55Incubation of RNA Transcript with Deoxyribonuclease (DNase)
03:59Complementary Deoxyribonucleic Acid (cDNA) Synthesis
05:03Real-Time Quantitative PCR (qPCR) to Amplify the Gene CCS1
05:43Total Protein of Cell Suspensions of C. arabica L.
06:26Enzymatic Assay for Caffeine Synthase
07:39Results: Enzymatic Activity of Caffeine Synthase Gene Evaluated via qPCR
08:30Conclusion

Summary

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Este protocolo descreve uma metodologia eficiente para a extração e quantificação de cafeína em suspensões celulares de c. arabica L. e um processo experimental para avaliar a atividade enzimática da cafeína sintase com o nível de expressão de o gene que codifica esta enzima.

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