Toeprinting Analysis of Translation Initiation Complex Formation on Mammalian mRNAs

00:04Title
00:34Preparation of mRNA
02:59Toeprinting Assay
06:32Sequencing Reactions and Gel Electrophoresis
07:53Results: Importance of IRES Secondary Structure in the Formation of Translation Initiation Complexes on an Uncapped XIAP IRES RNA
09:35Conclusion

Summary

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Toeprinting a pour but de mesurer la capacité de in vitro transcrit RNA pour former des complexes initiation traduction de ribosomes dans une variété de conditions. Ce protocole décrit une méthode pour toeprinting ARN chez les mammifères et peut être utilisé pour étudier la traduction fois cap-dépendante et pilotée par l’IRES.

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Protein Complex Affinity Capture à partir de cellules de mammifères Cryomilled

Préparation de vésicules encapsulant géantes Microsphères par centrifugation d'une émulsion eau-dans-huile

Immunofluorescence quantitative de mesure globale localisée Translation

Genome-wide Quantification de la traduction dans la levure de bière par Ribosome profilage

Un essai in vitro d’imagerie à molécule unique pour l’analyse de la cinétique de traduction cap-dépendante

Complémentation de l’activité d’épissage par un complexe Galectin-3 - U1 snRNP sur perles

Mesure de la composition du complexe de signalisation induisant la mort CD95 et traitement de la procaspase-8 dans ce complexe

Collecte de routine d’ensembles de données cryo-EM haute résolution à l’aide d’un microscope électronique à transmission de 200 KV

le développement et l’application de tests biophysiques pour l’évaluation de la formation de complexes ternaires induite par la protéolyse ciblant les chimères (PROTACS)

Toeprinting analyse de Translation Initiation complexe formé sur l’ARNm chez les mammifères

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