मेथिसिलिन प्रतिरोधी स्टेफिलोकोकस ऑरियस (एमआरएसए) संक्रमण के खिलाफ एक नैनोइमल्शन सहायक वैक्सीन की प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया का मूल्यांकन
Summary
वर्तमान प्रोटोकॉल एक नए नैनोइमल्शन सहायक वैक्सीन के भौतिक गुणों, प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया और विवो सुरक्षात्मक प्रभाव को तैयार और मूल्यांकन करता है।
Abstract
नैनोइमल्शन सहायक टीकों ने अपने छोटे कण आकार, उच्च थर्मल स्थिरता और वैध प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाओं को प्रेरित करने की क्षमता के कारण व्यापक ध्यान आकर्षित किया है। हालांकि, एक नोवेल नैनोइमल्शन एडजुवेंट वैक्सीन की प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया का मूल्यांकन करने के लिए व्यापक प्रोटोकॉल की एक श्रृंखला स्थापित करना महत्वपूर्ण है। इसलिए, इस लेख में एक वैक्सीन की भौतिक रासायनिक विशेषताओं (ट्रांसमिशन इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी [टीईएम], परमाणु बल माइक्रोस्कोपी [एएफएम], और गतिशील प्रकाश प्रकीर्णन [डीएलएस]), वैक्सीन एंटीजन और सिस्टम की स्थिरता (एक उच्च गति सेंट्रीफ्यूज परीक्षण, एक थर्मोडायनामिक स्थिरता परीक्षण, एसडीएस-पेज और पश्चिमी धब्बा द्वारा), और विशिष्ट प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया (आईजीजी 1, आईजीजी 2 ए, और आईजीजी 2 बी)। इस दृष्टिकोण का उपयोग करके, शोधकर्ता एक घातक MRSA252 माउस मॉडल में एक नए नैनोइमल्शन सहायक वैक्सीन के सुरक्षात्मक प्रभाव का सटीक मूल्यांकन कर सकते हैं। इन प्रोटोकॉल के साथ, प्रभावी सहायक क्षमता के मामले में सबसे आशाजनक नैनोइमल्शन वैक्सीन सहायक की पहचान की जा सकती है। इसके अलावा, विधियां भविष्य के विकास के लिए नए टीकों को अनुकूलित करने में मदद कर सकती हैं।
Introduction
मेथिसिलिन प्रतिरोधी स्टेफिलोकोकस ऑरियस (एमआरएसए) एक अवसरवादी रोगज़नक़ है जो दुनिया भर में एक गहन देखभाल इकाई (आईसीयू) वार्ड1, कार्डियोलॉजी विभागों और बर्न विभागों में उच्चतम संक्रमण दर में से एक है। एमआरएसए संक्रमण, मृत्यु दर और व्यापक दवा प्रतिरोध की उच्च दर प्रदर्शित करता है, जो नैदानिक उपचार में बड़ी कठिनाइयों को प्रस्तुत करताहै। 2017 में विश्व स्वास्थ्य संगठन (डब्ल्यूएचओ) द्वारा जारी एंटीबायोटिक प्रतिरोधी बैक्टीरिया की वैश्विक प्राथमिकता सूची में, एमआरएसए को सबसे महत्वपूर्ण श्रेणी3 में सूचीबद्ध किया गया था। इसलिए एमआरएसए संक्रमण के खिलाफ एक टीका तत्काल आवश्यक है।
एल्यूमीनियम सहायक का उपयोग लंबे समय से किया गया है, और सहायक सहायक तंत्र अपेक्षाकृत स्पष्ट, सुरक्षित, प्रभावी और अच्छी तरह से सहन किया जाताहै। एल्यूमीनियम सहायक वर्तमान में एक व्यापक रूप से उपयोग किए जाने वाले प्रकार के सहायक हैं। आमतौर पर यह माना जाता है कि एल्यूमीनियम नमक कणों पर अधिशोषित एंटीजन स्थिरता में सुधार कर सकते हैं और एंटीजन को लेने के लिए इंजेक्शन साइट की क्षमता को बढ़ा सकते हैं, अच्छा अवशोषण और धीमी गतिसे रिलीज प्रदान करते हैं। वर्तमान में, एल्यूमीनियम सहायक दवाओं का मुख्य नुकसान यह है कि उनके पास एक सहायक प्रभाव की कमी है या कुछ वैक्सीन उम्मीदवार एंटीजन6 पर केवल एक कमजोर सहायक प्रभाव प्रदर्शित करते हैं। इसके अलावा, एल्यूमीनियम सहायक आईजीई-मध्यस्थता अतिसंवेदनशीलताप्रतिक्रियाओं को प्रेरित करते हैं। इसलिए, एक मजबूत प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया को प्रोत्साहित करने के लिए नवीन सहायक विकसित करना आवश्यक है।
नैनोइमल्शन सहायक कोलाइडल फैलाव प्रणाली हैं जो तेल, पानी, सर्फेक्टेंट और कोसर्फेक्टेंट7 से बनी होती हैं। इसके अलावा, सहायक थर्मोडायनामिक रूप से स्थिर और आइसोट्रोपिक हैं, उच्च गति सेंट्रीफ्यूजेशन द्वारा आटोक्लेव या स्थिर किए जा सकते हैं, और हल्के तैयारी की स्थिति में अनायास बन सकते हैं। कई इमल्शन सहायक (जैसे एमएफ 59, एनबी001-002 श्रृंखला, एएस01-04 श्रृंखला, आदि) वर्तमान में बाजार में या नैदानिक अनुसंधान चरण में हैं, लेकिन उनके कण आकार 160 एनएम8 से अधिक हैं। इसलिए, नैनोस्केल (1-100 एनएम) औषधीय तैयारी (यानी, बड़े विशिष्ट सतह क्षेत्र, छोटे कण आकार, सतह प्रभाव, उच्च सतह ऊर्जा, छोटे आकार के प्रभाव और मैक्रो क्वांटम टनलिंग प्रभाव) के फायदे पूरी तरह से शोषण नहीं किया जा सकता है। वर्तमान प्रोटोकॉल में, 1-100 एनएम के व्यास आकार के साथ नैनोइमल्शन तकनीक पर आधारित एक नवीन सहायक को अच्छीसहायक गतिविधि प्रदर्शित करने के लिए रिपोर्ट किया गया है। हमने पुनर्संयोजन सबयूनिट वैक्सीन एंटीजन प्रोटीन एचआई (α-हेमोलिसिन उत्परिवर्ती [एचएलए] और फे आयन सतह निर्धारण कारक बी [आईएसडीबी] सबयूनिट एन 2 सक्रिय टुकड़ा संलयन प्रोटीन) का परीक्षण किया; भौतिक गुणों और स्थिरता की जांच करने, इंट्रामस्क्युलर प्रशासन के बाद इसकी विशिष्ट एंटीबॉडी प्रतिक्रिया का मूल्यांकन करने और माउस प्रणालीगत संक्रमण मॉडल का उपयोग करके वैक्सीन के सुरक्षात्मक प्रभाव का परीक्षण करने के लिए प्रक्रियाओं की एक श्रृंखला स्थापित की गई थी।
Protocol
Representative Results
Discussion
आईएसडीबी, एक जीवाणु कोशिका भित्ति-लंगर और लौह-विनियमित सतह प्रोटीन, हीम आयरन15 प्राप्त करने की प्रक्रिया में एक महत्वपूर्ण भूमिका निभाता है। एचएलए, अल्फा विष, एमआरएसए में ज्ञात सबसे प्र?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
इस शोध को चीन के राष्ट्रीय कुंजी अनुसंधान और विकास कार्यक्रम के नंबर 2021 वाईएफसी 2302603, एनएसएफसी के नंबर 32070924 और 32000651 और चोंगकिंग के प्राकृतिक विज्ञान फाउंडेशन प्रोजेक्ट प्रोग्राम के नंबर 2019 jcyja-msxmx0159 द्वारा समर्थित किया गया था।
Materials
| 5424-Small high speed centrifugeFA-45-24-11 | Eppendorf, Germany | 5424000495 | |
| 96-well plates | Corning Incorporated, USA | CLS3922 | |
| AFM Dimension FastScan | BRUKER, Germany | null | |
| Alcohol lamp | Shenzhen Yibaxun Technology Co.,China | YBS-AA-11408 | |
| Balb/c mice | Beijing HFK Bioscience Co. Ltd. | ||
| BCIP/NBT | Fuzhou Maixin Biotechnology Development Company,China | BCIP/NBT | |
| Bio-Rad 6.0 microplate reader | Bio-Rad Laboratories Incorporated Limited Co., CA, USA | null | |
| BL21 Competent Cell | Merck millipore,Germany | 70232-3CN | |
| BSA-100G | Sigma-Aldrich, USA | B2064-100G | |
| Centrifuge 5810 R | Eppendorf, Germany | 5811000398 | |
| Coomassie bright blue G-250 staining solution | MIKX,China | DB236 | |
| Decolorization solution | BOSTER,China | AR0163-2 | |
| Electro-heating standing-temperature cultivator HH-B11-420 | Shanghai Yuejin Medical Device Factory, China | null | |
| Electrophoresis apparatus | Beijing Liuyi Instrument Factory, China | DYCZ-25D | |
| Gel image | Tanon, USA | null | |
| Glutathione-Sepharose Resin GST | Mei5bio,China | affinity chromatography resin | |
| H2SO4 | Chengdu KESHI Chemical Co., LTD,China | 7664-93-9 | |
| HI recombinant protein | Third Military Medical University,China | 110-27-0 | |
| HRP -Goat Anti-Mouse IgG | Biodragon, China | BF03001 | |
| HRP- Goat anti-mouse IgG1 | Biodragon, China | BF03002R | |
| HRP- Goat anti-mouse IgG2a | Biodragon, China | BF03003R | |
| HRP- Goat anti-mouse IgG2b | Biodragon, China | BF03004R | |
| Inoculation loop | Haimen Feiyue Co.,LTD,China | YR-JZH-1UL | |
| IsdB and Hla clones | Shanghai Jereh Biotechnology Co,China | null | |
| Isopropyl nutmeg (pharmaceutic adjuvant) | SEPPIC, France | null | |
| isopropyl- β-D-1-mercaptogalactopyranoside | fdbio,China | FD3278-1 | |
| LB bouillon culture-medium | Beijing AOBOX Biotechnology Co., LTD,China | 02-136 | |
| Lnfrared physiotherapy lamp | Guangzhou Runman Medical Equipment Co.,China | 7600 | |
| Low temperature refrigerated centrifuge | Eppendorf, Germany | null | |
| Malvern NANO ZS | Malvern Instruments Ltd., UK | null | |
| MH(A) medium | Beijing AOBOX Biotechnology Co., LTD,China | 02-051 | |
| MH(B) medium | Beijing AOBOX Biotechnology Co., LTD,China | 02-052 | |
| Micro plate washing machine 405 LSRS | Bio Tek Instruments,Inc Highland Park,USA | null | |
| Mini-TBC Compact Film Transfer Instrument | BeiJingDongFangRuiLi Co.,LTD,China | 1658030 | |
| MMC packing | TOSOH(SHANGHAI)CO.,LTD | 0022818 | |
| MRSA252 | USA, ATCC | null | |
| Nanodrop ultraviolet spectrophotometer | Thermo Scientific, USA | null | |
| New FlashTM Protein any KD PAGE Protein electrophoresis gel kit | DAKEWE, China | 8012011 | |
| PBS | biosharp, China | null | |
| PCR, Amplifier | Thermal Cycler, USA | null | |
| pGEX-target gene recombinant plasmid | Shanghai Jereh Biotechnology Co,China | B3528G | |
| Phosphotungstic acid | G-CLONE, China | CS1231-25g | |
| pipette | Eppendorf, Germany | 3120000844 | |
| polyoxyethylated castor oil (pharmaceutic adjuvant) | Aladdin, China | K400327-1kg | |
| Primary antibody | Laboratory homemade:from immunized mice with positive sera | null | See Reference 11 for details |
| propylene glycol (pharmaceutic adjuvant) | Sigma-Aldrich, USA | P4347-500ML | |
| Protein Marker | Thermo Scientufuc, USA | 26616 | |
| PVDF TRANSFER MEMBRANE | Invitrogen,USA | 88518 | |
| Scanning Electron Microscope | JEOL,Japan | JSM-IT800 | |
| Sodium pentobarbital | Merck,Germany | Tc-P8411 | |
| Talos L120C TEM | Thermo Fisher, USA | null | |
| TMB color solution | TIAN GEN, China | PA107-01 | |
| Turtle kits | Xiamen Bioendo Technology Co.,LTD | ES80545 | |
| Tween-20 | Macklin, China | 9005-64-5 |
References
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