Summary

Combinato Shuttle-Box Training con elettrofisiologiche Cortex registrazione e stimolazione come strumento per studiare percezione e apprendimento

Published: October 22, 2015
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Summary

Shuttle-box apprendimento evitamento è ben consolidata in neuroscienze comportamentali. Questo protocollo descrive come navetta-box di apprendimento nei roditori può essere combinata con microstimolazione site-specific elettrica intracorticale (ICMS) e croniche simultanea nelle registrazioni vivo come strumento per studiare molteplici aspetti dell'apprendimento e della percezione.

Abstract

Apprendimento Shuttle-box evasione è un metodo consolidato in neuroscienze comportamentali e sperimentali messe a punto sono stati tradizionalmente su misura; l'attrezzatura necessaria è ora disponibile da diverse società commerciali. Questo protocollo fornisce una descrizione dettagliata di una navetta-box evitare paradigma di apprendimento nei due sensi nei roditori (gerbilli qui Mongolia; Meriones unguiculatus) in combinazione con microstimolazione site-specific elettrica intracorticale (ICMS) e simultanee elettrofisiologici vivo registrazioni croniche in. Il protocollo dettagliato è applicabile per studiare molteplici aspetti del comportamento di apprendimento e la percezione di diverse specie di roditori.

ICMS site-specific dei circuiti corticali uditive come stimoli condizionati qui viene utilizzato come strumento per testare la rilevanza percettiva di specifici afferenti, efferenti e connessioni intracorticali. Pattern di attivazione distinti possono essere evocati da utilizzando diversi arr elettrodi di stimolazioneays per, ICMS strato dipendenti locali o siti distanti ICMS. Utilizzando analisi comportamentale di rilevamento del segnale si può determinare quale strategia stimolazione è più efficace per suscitare un segnale comportamentale rilevabile e saliente. Inoltre, multicanale registrazioni parallele utilizzando diversi modelli di elettrodi (elettrodi di superficie, elettrodi di profondità, etc.) consentono di indagare osservabili neuronali nel corso tempo di tali processi di apprendimento. Esso verrà discusso come i cambiamenti del design comportamentale può aumentare la complessità cognitiva (ad esempio il rilevamento, la discriminazione, l'apprendimento di inversione).

Introduction

Un obiettivo fondamentale di neuroscienza comportamentale è di stabilire legami specifici tra neuronali proprietà strutturali e funzionali, l'apprendimento, e la percezione. Attività neurale associata con la percezione e l'apprendimento può essere studiato dalla registrazione elettrofisiologica dei potenziali d'azione e potenziali di campo locale in diverse strutture cerebrali in più siti. Mentre registrazioni elettrofisiologiche forniscono associazioni correlativi tra l'attività e il comportamento neuronale, microstimolazione diretta elettrica intracorticale (ICMS) da oltre un secolo è stato il metodo più diretto per i rapporti di prova causali delle popolazioni di neuroni eccitati e dei loro effetti sul comportamento e percettivi 1 – 3. Molti studi hanno dimostrato che gli animali sono in grado di fare uso di varie proprietà spaziali e temporali di stimoli elettrici in compiti percettivi seconda del sito di stimolazione entro per esempio retinotopica 4, tonotopic 5, o somatotopica 6 regioni della corteccia. Propagazione di attività elettricamente evocata nella corteccia è determinato principalmente dalla disposizione delle fibre assonali e la loro connettività sinaptica distribuito 2 che, nella corteccia, è chiaramente layer-7 dipendenti. L'attivazione polisinaptici risultante evocata dalla ICMS è ormai molto più diffuso di effetti diretti della 2,8,9 campo elettrico. Questo spiega perché le soglie di effetti percettivi indotte da microstimolazione intracorticale possono essere fortemente dipendente dal livello di 8,10,11 e il sito-dipendente 9. Uno studio recente ha dimostrato in dettaglio che la stimolazione di strati superiori ha prodotto più diffusa attivazione di circuiti corticocorticali in strati principalmente supragranular, mentre la stimolazione di strati più profondi della corteccia risultato in una focale, corticoefferent ricorrente intracolumnar attivazione. Esperimenti comportamentali parallele rivelato che quest'ultimo ha di gran lunga inferiore thr rilevamento percettivoesholds 8. Pertanto, il vantaggio di site-specific ICMS stimoli come condizionato è stato sfruttato in combinazione con registrazioni elettrofisiologiche di mettere in relazione causale specifiche attivazioni circuiti corticali 8 a misure comportamentali di apprendimento e percezione nella shuttle-box.

La navetta-box paradigma a due vie è un apparecchio da laboratorio consolidata per studiare elusione apprendimento 12. Una navetta-scatola è composta da 2 vani separati da un ostacolo o di porta. Un stimolo condizionato (CS) che è rappresentato da un segnale adatto come una luce o il suono, è potenzialmente seguito da uno stimolo incondizionato avversivo (US), come ad esempio uno shock piedi su un pavimento griglia metallica. I soggetti possono imparare ad evitare USA da spola da un compartimento shuttle-box all'altra in risposta al CS. Apprendimento Shuttle-box comporta una sequenza di fasi di apprendimento distinguibili 13,14: In primo luogo,soggetti imparano a prevedere gli Stati Uniti dal CS dal condizionamento classico e di fuggire dagli Stati Uniti dal condizionamento strumentale, come gli Stati Uniti è terminata sulla spola. In una fase successiva, i soggetti apprendono evitare USA complessivamente da spola in risposta alla prima CS US insorgenza (reazione evitamento). In generale, l'apprendimento di navetta-box coinvolge condizionamento classico, condizionamento strumentale, così come un comportamento goal-directed seconda fase 14 di apprendimento.

La procedura di shuttle-box può essere installato facilmente e in generale produce un comportamento affidabile dopo alcune sedute di allenamento giornaliere di 15 – 17. Oltre alla semplice evasione condizionata (rilevamento), lo shuttle-box può essere ulteriormente utilizzato per studiare la discriminazione stimolo impiegando paradigmi go / Nogo. Qui, gli animali sono addestrati per evitare USA da una risposta condizionata (CR) (go comportamento; navetta nel vano opposta) in risposta ad un <strong> go-stimolo (CS +) e da comportamenti nogo (rimanere nel vano corrente, senza CR) in risposta ad una di Nogo-stimolo (CS) microstimolazione parallelo e la registrazione di attività neurale con gli array multielettrodico alta densità permetterà di studiare. i meccanismi fisiologici alla base di apprendimento di successo. Numerosi dettagli tecnici che sono fondamentali per le combinazioni di successo della formazione di navetta-box, ICMS e elettrofisiologia parallelo, saranno discussi.

Protocol

Tutti gli esperimenti presentati in questo lavoro sono state condotte in accordo con gli standard etici definiti dalla legge tedesca per la protezione degli animali da esperimento. Gli esperimenti sono stati approvati dal comitato etico dello stato della Sassonia-Anhalt. 1. Su misura multicanale Electrode Array per microstimolazione e registrazione Matrice microstimolazione su misura Per la consegna di ICMS, preparare elettrodi di stimolazione nella progettazione dello sp…

Representative Results

Questa sezione illustra un esempio rappresentativo di apprendimento shuttle-box in un gerbillo mongolo. Il soggetto è stato addestrato per discriminare il sito ICMS tra due elettrodi di stimolazione impiantato 700 micron uno dall'altro nella corteccia uditiva (figure 1 e 2). Array di stimolazione possono essere personalizzati in diversi modelli spaziali (Figura 1). Qui, la discriminazione dei due siti ICMS è appreso entro 3 allenamenti con la presentazione di 30 CS + e CS-ciascuno…

Discussion

Questo protocollo descrive un metodo di ICMS simultanei site-specific e registrazioni elettrofisiologiche multicanale in un animale di apprendimento utilizzando un avversivo piede-shock sistema di navetta-box controllato a doppio senso. Il protocollo sottolinea concetti tecnici chiave per tale combinazione e sottolinea l'importanza della messa a terra della animale solo tramite l'elettrodo di un terreno comune, lasciando il gridfloor ad una tensione fluttuante. Qui, uditivo apprendimento navetta-box è stato app…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Il lavoro è stato sostenuto da sovvenzioni dal Deustche Forschungsgemeinschaft DFG e il Leibniz-Institut per Neurobiologia. Ringraziamo Maria-Marina Zempeltzi e Kathrin Ohl per l'assistenza tecnica.

Materials

Teflon-insulated stainless steel wire California Fine Wire diam. 50µm w/ isolation
Pin connector system  Molex Holding GmbH 510470200 1.25 mm pitch PicoBlade
TEM grid Quantifoil Science Services EQ225-N27
Dental acrylic Paladur Heraeus Kulzer 64707938
Hand-held drill OmniDrill35 WPI  503599
Ketamine 500mg/10ml Ratiopharm GmbH 7538837
Rompun 2%, 25ml Bayer Vital GmbH 5066.0
Sodium-Chloride 0.9%, 10ml B.Braun AG  PRID00000772
Lubricant KY-Jelly Johnson & Johnson
Shuttle-box E10-E15 Coulbourn Instruments H10-11M-SC
Stimulus generator MCS STG 2000 Multichannel Systems
Plexon Headstage cable 32V-G20 Plexon Inc. HSC/32v-G20
Plexon Headstage  32V-G20 Plexon Inc. HST/32v-G20
PBX preamplifier 32 channels Plexon Inc. 32PBX box
Multichannel Acquisition System Plexon Inc. MAP 32/HLK2
Cryostate CM3050 S Leica Microsystems GmbH
Signal processing Card Ni-Daq National Instruments
Lab StandardTM Stereotaxic Instruments Stoelting Co. 
Audio attenator g.pah g.pah Guger technologies
Cresyl violet acetate Roth GmbH 7651.2
Roticlear  Roth GmbH A538.1
Sodium acetate trihydrate Roth GmbH 6779.1
Potassium hexacyanoferrat(II) trihydrate Roth GmbH 7974.2
Di-sodium hydrogen phospahte dihydrate Merck 1,065,801,000
ICM Impedance Conditioning Module FHC 55-70-0
Animal Temperarture Controler World Precision Instruments ATC2000

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Cite This Article
Happel, M. F., Deliano, M., Ohl, F. W. Combined Shuttle-Box Training with Electrophysiological Cortex Recording and Stimulation as a Tool to Study Perception and Learning. J. Vis. Exp. (104), e53002, doi:10.3791/53002 (2015).

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