静电粘附实验对整合素激活的T细胞研究

T淋巴细胞的粘附是在免疫应答中¹的基本处理。这是需要的T细胞相互作用与内皮细胞装潢毛细管壁，对于淋巴结内扫描的抗原呈递细胞（APC），并为免疫突触的形成（IS）与靶细胞^2。这些要求在功能上和动力学截然不同。淋巴细胞外渗的过程包括趋化，滚动，粘附牢固，和轮回。滚动坚定的附着力过渡需要T细胞快速响应G蛋白偶联受体信号。这种反应产生，减缓和逮捕的滚动单元³的整联配体的相互作用。在整合的亲和力立即改变介导了这一过程。迁移需要动态相互作用betweenTcells和血管内皮细胞与形成粘连的“前端”和粘连在“后端”破损同的成形和分断⁴之间大约一分钟的时间间隔。在IS形成inminutes，但需要保持不变为⁶小时。

有趣的是，1粘附分子，整合素家族成员淋巴细胞功能相关抗原（LFA） – 1，是对所有这些过程⁵是必不可少的。 LFA-1介导的粘附通过相互作用与免疫球蛋白超家族的几个成员。最广​​泛研究的配体​​与LFA-1的最高亲和力的细胞间粘附分子（ICAM）-1。非活化的外周血淋巴细胞表达低亲和性的LFA-1在细胞表面上，因此不能粘附的ICAM-1包被的表面。 LFA-1的亲和力是可变的，通过几个信号传导事件，例如G蛋白偶联受体活化，细胞因子的刺激，并通过T细胞受体（TCR）介导的信号调节。的LFA-1表达的细胞内活化到细胞外空间将得到的高亲和性的形式吨hrough相互作用与ICAM-1。这个途径被称为由内而外的信令^7。同样地，通过LFA-1从细胞外空间的信号被称为由外向内的信令。

在细胞内信号参与由内而外和由外而内的信号级联是当前研究的一大重点。小GTP酶Rap1的最近成为的由内而外的重要组成部分信令是常见的两种TCR结扎和细胞因子信号^8。 Rap1的中整合素激活的关键作用是由Rap1的过度表达刺激T细胞的整合素依赖性粘附的发现凸显，而T细胞粘连阻塞由显性负Rap1的⁹的表达。在我们的整合调控Rap1的理解这些进展利用体外工具已经完成。其中之一是这里所描述的静态粘附实验。

这种方法的总体目标是研究Ŧ细胞粘附性的ICAM-1包被的表面。更具体地讲，它是用来客观地测量和量化向着它的反配体LFA-1的亲和力在活细胞中的实时性，在不同条件下。这种技术使用涂有ICAM-1的模拟蜂窝表面的T细胞相互作用聚苯乙烯孔。许多先前所描述的静态T细胞黏附实验是实验复杂。这些通常需要T细胞的测定法进行放射性标记，用于培养的牛角膜细胞建立的细胞外基质作为基质的T细胞粘附，或称为非生理性T细胞的刺激在延长的持续时间，以促进T细胞粘附^10。利用荧光测量以下的粘附培养量化T细胞是一种更敏感和准确的定量的方法相比，流式细胞术和显微术，如被用在许多其他的检测系统^11。另外，单电池microscop整本地化的集成电路分析不允许以同样的方式作为荧光测量的宽峰，基于群体分析。而激活态特异性LFA-1抗体是市售的，这些抗体具有低灵敏度相对于此处所述的方法。过替代技术的主要优点是它的简单性，并同时检测多种实验条件的能力。当考虑这个方法，一个特定的应用，应该考虑到，T细胞应阴性选择，新鲜分离的，并用荧光标记物。