Summary

골수 유래 대 식세포를 사용하여 대식 세포 분극 조사

Published: June 23, 2013
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Summary

이 문서는 쉽게 쉽게 적응을 설명<em> 체외에서</em대식 세포 분극을 조사하기> 모델. GM-CSF/M-CSF의 면전에서, 골수에서 조혈 줄기 / 전구 세포 M1 또는 M2 자극 한 다음, 단핵구 분화에 연결됩니다. 활성 상태는 세포 표면 항원 유전자 발현 및 세포 신호 전달 경로의 변화에​​ 의해 추적 할 수 있습니다.

Abstract

이 문서는 대식 세포 분극을 조사하기 위해 체외 모델에서 쉽게 쉽게 적응을 설명합니다. GM-CSF/M-CSF의 면전에서, 골수에서 조혈 줄기 / 전구 세포 M1 또는 M2 자극 한 다음, 단핵구 분화에 연결됩니다. 활성 상태는 세포 표면 항원 유전자 발현 및 세포 신호 전달 경로의 변화에​​ 의해 추적 할 수 있습니다.

Introduction

고전적인 염증 반응, 조직을 침투 대식 세포의 구별은 종종 호스트 조직 생리 기능 1-8 조절에 중요한 역할을 편광 정품 인증 상태를 표시합니다. 자극에, 대식 세포 활성화는 고전 (M1) 및 대체 (M2) 활성화 2, 4, 9로 정렬 할 수 있습니다. M1 대 식세포의 활성화는 TNF-α와 같은 염증성 사이토 카인의 생산에 이르는 수신자 같은 수용체 (TLR은) 핵 인자 카파 B (NFκB) / C 6 월 N-말단 키나제 1 (JNK1)의 활성화에 따라 IL- iNOS의의 1β 및 활성화하는 등의 질화물 산화물 (NO) 10, 11와 같은 활성 산소 종의 생산 증가의 결과. 반면, M2 대식 세포 활성화 모집 PPARγ, PPARδ, 또는 IL-4-STAT6 경로는 대체 만노오스 수용체 CD206의 상향 조절과 연관되어, 항 염증 (M2) 활성화 및 arginase 1 (이며 Arg1) 6, 12로 이어지는 – 14 </>을 먹다.

골수 유래 대 식세포 (BMDM)는 활성화 된 대 식세포 15 편광을 제어하는 메커니즘을 이해하는 체외 모델의 이상을 제시한다. M2 대식 세포의 편광은 IL-4 및 / 또는 IL-13에 의해 유도 될 수 있지만, 특히 M1 대 식세포의 활성화는 리포 다당류 (LPS) 자극에 의​​해 유도 될 수있다. 성숙한 골수 유래 대 식세포 활성화 된 대 식세포는 CD11b, F4/80, CD11c, CD206, CD69, CD80 및 CD86 9, 16, 17 등의 표면 항원의 발현 유동 세포 계측법 분석을 통해 식별 할 수 있습니다. 또한, 시토 킨 생산 및 대식 세포 분극과 관련된 세포 신호 전달 경로의 변화는 정량적 RT-PCR 및 웨스턴 각각 내듯 측정 할 수 있습니다. 요약하면, 마우스 골수 유래 대 식세포는 체외에서 대식 세포 분극을 연구하는 중요한 모델이 될 수 있습니다.

Protocol

1. 골수 세포의 분리 6-8주 오래된 마우스에서 대퇴골과 경골 뼈를 분리, 머리를 헹구어 낸 후 뼈를 자르면. 차가운 PBS 2 %의 열 비활성화 태아 소 혈청 (FBS) (3-5 ML / 마우스)에 골수를 플러시 21G 바늘과 10 ML의 주사기를 사용합니다. 세포를 해리 21G 바늘을 통해 4-6 번 골수를 전달합니다. 세포 덩어리, 뼈, 머리 및 다른 세포 / 조직을 제거하기 위해 70 μm의 셀 스트레이너?…

Representative Results

BMDM 생성 과정의 개략적 인 설명은 (그림 1) 표시됩니다. 그들은 CD11b + F4/80 + 세포의 95-99% (그림 2)를 나타냅니다 때 성숙한 대식 세포의 순도는 7 일에 관찰 할 수 있습니다. 편광 식세포가 CD11b, F4/80에 대한 항체를 사용하여 검사 할 수 있습니다, CD11c와 CD206는 유동 세포 계측법 분석에 의해 따랐다. 그림 3에서와 같이, M1 대 식세포는 다음과 같이 발견 된 CD11b + F…

Discussion

우리는 여기에서 골수 전구 세포에서 유래 대 식세포의 활성화를 유도 할 수있는 간단하고 체외에서 쉽게 적응할 수있는 절차를보고합니다. 이 절차는 대식 세포의 편광에 대한 책임 메커니즘의 연구에 사용할 수 있습니다. 성숙한 대식 세포의 순도는이 프로토콜의 평균에게 95-99%을 사용하여 얻은하고 추가 정제 과정이 필요하지 않습니다. 대식 세포 분극, 자궁외 식 또는 유전자의 특정 ?…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

이 작품은 미국 심장 협회 (박사 Beiyan 저우에 BGIA 7,850,037)에 의해 지원되었다.

Materials

Name of Reagent/Material Company Catalog Number Comments
IMDM Thermo Scientific SH30259.01
Fetal bovine serum Invitrogen 10438-026
Murine GM-CSF PeproTech 315-03
NH4Cl StemCell Technologies 7850
L-929 ATCC CCL-1
70 μm cell strainer BD Biosciences 352350
10 x PBS Thermo Scientific AP-9009-10
Anti-mouse CD11b-APC eBioscience 17-0112-81
Anti-mouse F4/80-FITC eBioscience 11-4801-81
Anti-mouse CD69-PE eBioscience 12-0691-81
Anti-mouse CD86-PE eBioscience 12-0862-81
Propidium Iodine Invitrogen P3566

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Cite This Article
Ying, W., Cheruku, P. S., Bazer, F. W., Safe, S. H., Zhou, B. Investigation of Macrophage Polarization Using Bone Marrow Derived Macrophages. J. Vis. Exp. (76), e50323, doi:10.3791/50323 (2013).

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